| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-18页 |
| ·干扰素的分类和生物学特性 | 第13-14页 |
| ·干扰素的分类 | 第13页 |
| ·干扰素的性质和生物学特性 | 第13-14页 |
| ·干扰素的生物学功能及其作用机制 | 第14-15页 |
| ·抗病毒作用及其作用机制 | 第14页 |
| ·抗肿瘤作用及其作用机制 | 第14-15页 |
| ·免疫调节活性及其作用机制 | 第15页 |
| ·抗寄生虫、细菌作用及其作用机制 | 第15页 |
| ·干扰素在兽医临床上的应用 | 第15-16页 |
| ·基因工程干扰素的研究进展 | 第16页 |
| ·重组水貂干扰素的研究进展及其生物制剂需求的迫切性 | 第16-18页 |
| 第二章 水貂 IFN-α，γ基因克隆及序列分析 | 第18-34页 |
| ·材料与方法 | 第18-19页 |
| ·宿主菌、病毒、细胞与质粒 | 第18页 |
| ·主要实验仪器及试剂 | 第18页 |
| ·培养基及相关溶液配制 | 第18-19页 |
| ·实验动物 | 第19页 |
| ·引物设计 | 第19页 |
| ·方法 | 第19-23页 |
| ·水貂外周血淋巴细胞制备及 IFN-α，γ的诱生 | 第19-20页 |
| ·水貂外周血淋巴细胞总RNA 的提取 | 第20页 |
| ·MuIFN-α、γ基因的克隆 | 第20-21页 |
| ·pT/MuIFN-α和pT/MuIFN-γ重组质粒构建及鉴定 | 第21-23页 |
| ·结果 | 第23-32页 |
| ·水貂IFN-α和IFN-γ基因序列扩增 | 第23-24页 |
| ·重组质粒pT/MuIFN-α和pT/MuIFN-γ酶切鉴定 | 第24-25页 |
| ·重组质粒pT/MuIFN-α1-13 和pT/MuIFN-γ PCR 鉴定结果 | 第25-26页 |
| ·MuIFN-α和 MuIFN-γ基因测序结果分析 | 第26-31页 |
| ·水貂IFN-γ基因序列分析 | 第31-32页 |
| ·讨论 | 第32-34页 |
| ·水貂外周血淋巴细胞总RNA 的提取 | 第32页 |
| ·水貂 IFN-α基因的分型 | 第32-33页 |
| ·水貂IFN-α，γ基因的扩增及序列分析 | 第33-34页 |
| 第三章 水貂 IFN-α1-13 和 IFN-γ基因原核表达 | 第34-45页 |
| ·材料 | 第34-36页 |
| ·实验动物，载体，宿主菌，病毒，细胞 | 第34页 |
| ·培养基及相关溶液配制 | 第34-35页 |
| ·酶与试剂 | 第35页 |
| ·主要仪器设备 | 第35页 |
| ·引物设计 | 第35-36页 |
| ·方法 | 第36-39页 |
| ·水貂IFN-α基因（去掉信号肽）的扩增 | 第36页 |
| ·水貂IFN-γ基因（去掉信号肽）的扩增 | 第36页 |
| ·水貂 IFN-α和 IFN-γ基因原核表达载体的构建 | 第36-37页 |
| ·水貂 IFN-α和 IFN-γ成熟蛋白基因的表达载体转化宿主菌 | 第37页 |
| ·水貂 IFN-α和 IFN-γ成熟蛋白基因的表达载体的鉴定 | 第37-38页 |
| ·阳性克隆菌的诱导表达 | 第38页 |
| ·大肠杆菌表达的水貂IFN-α和IFN-γ可溶性鉴定 | 第38页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第38-39页 |
| ·Western-blot 检测表达产物 | 第39页 |
| ·结果 | 第39-43页 |
| ·水貂IFN-α和IFN-γ成熟蛋白基因的扩增结果 | 第39-40页 |
| ·重组表达载体的鉴定 | 第40-42页 |
| ·阳性工程菌的诱导表达 | 第42页 |
| ·大肠杆菌表达的水貂α干扰素可溶性鉴定 | 第42页 |
| ·重组水貂IFN-α和IFN-γ蛋白的Western-blot 分析 | 第42-43页 |
| ·讨论 | 第43-45页 |
| ·去除信号肽再进行原核表达的原因 | 第43页 |
| ·表达的蛋白形成包涵体的原因 | 第43页 |
| ·表达蛋白的Western-blot 分析 | 第43-45页 |
| 第四章 水貂 IFN-α2、IFN-α12 和 IFN-γ的抗病毒活性分析 | 第45-55页 |
| ·材料 | 第45-46页 |
| ·宿主菌，细胞，病毒 | 第45页 |
| ·培养基及相关溶液配制 | 第45页 |
| ·试剂 | 第45-46页 |
| ·主要仪器设备 | 第46页 |
| ·方法 | 第46-48页 |
| ·大肠杆菌表达的水貂IFN-α2、IFN-α12 和IFN-γ包涵体的制备 | 第46页 |
| ·包涵体的变性 | 第46页 |
| ·纯化 | 第46-47页 |
| ·蛋白复性 | 第47页 |
| ·复性蛋白的浓缩 | 第47页 |
| ·水泡性口炎病毒（VSV）病毒感染力的滴定（TCID50 的测定） | 第47页 |
| ·重组水 I貂FN- 2α I、FN- 1α2 和IFN- γ抗病毒活性的测定 | 第47-48页 |
| ·结果 | 第48-53页 |
| ·重组水貂IFN-α2、IFN-α12 和IFN-γ的纯化 | 第48-49页 |
| ·水泡性口炎病毒（VSV）病毒感染力的滴定（TCID50 的测定） | 第49页 |
| ·重组水貂IFN-α2、IFN-α12 和IFN-γ活性的测定 | 第49-53页 |
| ·讨论 | 第53-55页 |
| ·包涵体蛋白的洗涤与溶解 | 第53页 |
| ·包涵体蛋白的复性 | 第53-54页 |
| ·重组水貂干扰素活性测定 | 第54-55页 |
| 第五章 全文结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 附录 | 第60-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 作者简历 | 第65页 |
