| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第1章 绪论 | 第14-26页 |
| 1.1 选题意义 | 第14页 |
| 1.2 纳豆激酶概述 | 第14-24页 |
| 1.2.1 纳豆及纳豆激酶 | 第14-15页 |
| 1.2.2 纳豆激酶的结构与理化特性 | 第15-16页 |
| 1.2.3 纳豆激酶的药理特性 | 第16-19页 |
| 1.2.4 纳豆激酶生产现状 | 第19-22页 |
| 1.2.5 纤溶酶与纳豆激酶 | 第22页 |
| 1.2.6 维生素K2与纳豆激酶 | 第22-24页 |
| 1.3 研究目的及内容 | 第24-26页 |
| 1.3.1 研究目的 | 第24页 |
| 1.3.2 研究内容 | 第24-26页 |
| 第2章 纳豆激酶高产菌株的筛选及鉴定 | 第26-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-27页 |
| 2.1.1 样品 | 第26页 |
| 2.1.2 试剂 | 第26页 |
| 2.1.3 设备 | 第26-27页 |
| 2.1.4 培养基 | 第27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-30页 |
| 2.2.1 菌种筛选 | 第27-28页 |
| 2.2.2 生理生化实验 | 第28页 |
| 2.2.3 菌株的分子生物学鉴定 | 第28-29页 |
| 2.2.4 纳豆激酶基因aprN的克隆 | 第29页 |
| 2.2.5 大肠杆菌JM109感受态细胞的制备 | 第29-30页 |
| 2.2.6 菌株16S rDNA和纳豆激酶基因与质粒pMD19-T的连接与转化 | 第30页 |
| 2.2.7 阳性转化子的筛选与验证 | 第30页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第30-35页 |
| 2.3.1 尿激酶标准曲线 | 第30-31页 |
| 2.3.2 菌种筛选 | 第31-32页 |
| 2.3.3 菌株TN-02的形态及特征 | 第32页 |
| 2.3.4 菌株TN-02的生理生化实验 | 第32-33页 |
| 2.3.5 菌株TN-02 16S rDNA的鉴定 | 第33-34页 |
| 2.3.6 纳豆激酶基因aprN的克隆 | 第34-35页 |
| 2.4 小结 | 第35-36页 |
| 第3章 纳豆芽孢杆菌TN-02产纳豆激酶发酵条件的优化 | 第36-47页 |
| 3.1 实验材料 | 第36-37页 |
| 3.1.1 菌种 | 第36页 |
| 3.1.2 试剂 | 第36页 |
| 3.1.3 设备 | 第36-37页 |
| 3.1.4 培养基 | 第37页 |
| 3.2 实验方法 | 第37-39页 |
| 3.2.1 纳豆激酶活力测定方法 | 第37页 |
| 3.2.2 甘油的测定方法 | 第37页 |
| 3.2.3 纳豆芽孢杆菌TN-02的生长曲线 | 第37页 |
| 3.2.4 碳源对产纳豆激酶的影响 | 第37页 |
| 3.2.5 氮源对产纳豆激酶的影响 | 第37页 |
| 3.2.6 甘油添加量对产纳豆激酶的影响 | 第37页 |
| 3.2.7 豆粕添加量对产纳豆激酶的影响 | 第37-38页 |
| 3.2.8 不同氨基酸对产纳豆激酶的影响 | 第38页 |
| 3.2.9 无机盐对产纳豆激酶的影响 | 第38页 |
| 3.2.10 发酵时间对产纳豆激酶的影响 | 第38页 |
| 3.2.11 10 L发酵罐放大实验控制工艺 | 第38-39页 |
| 3.3 实验结果 | 第39-45页 |
| 3.3.1 纳豆芽孢杆菌TN-02生长曲线 | 第39页 |
| 3.3.2 碳源对产纳豆激酶的影响 | 第39-40页 |
| 3.3.3 氮源对产纳豆激酶的影响 | 第40-41页 |
| 3.3.4 甘油添加量对产纳豆激酶的影响 | 第41页 |
| 3.3.5 豆粕添加量对产纳豆激酶的影响 | 第41-42页 |
| 3.3.6 氨基酸对产纳豆激酶的影响 | 第42页 |
| 3.3.7 无机盐对产纳豆激酶的影响 | 第42-43页 |
| 3.3.8 发酵时间对产纳豆激酶的影响 | 第43页 |
| 3.3.9 10 L发酵罐发酵控制工艺 | 第43-45页 |
| 3.4 小结 | 第45-47页 |
| 第4章 纳豆芽孢杆菌TN-02发酵产物中纤溶酶纯度分析 | 第47-56页 |
| 4.1 实验材料 | 第47-48页 |
| 4.1.1 实验菌种和质粒 | 第47页 |
| 4.1.2 试剂 | 第47页 |
| 4.1.3 设备 | 第47-48页 |
| 4.1.4 培养基和溶液试剂 | 第48页 |
| 4.2 实验方法 | 第48-52页 |
| 4.2.1 质粒pPIC9K和pMD19T-aprN的提取 | 第49页 |
| 4.2.2 卡那霉素抗性基因kan的扩增 | 第49页 |
| 4.2.3 重组质粒pMD1 9T-aprNA kan的构建 | 第49-50页 |
| 4.2.4 纳豆芽孢杆菌感受态的制备及转化 | 第50-51页 |
| 4.2.5 重组菌的生长曲线 | 第51页 |
| 4.2.6 纳豆激酶的纯化 | 第51-52页 |
| 4.2.7 重组菌发酵产物SDS-PAGE分析 | 第52页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第52-54页 |
| 4.3.1 卡那霉素基因kan的扩增 | 第52-53页 |
| 4.3.2 纳豆激酶基因缺失重组菌的构建 | 第53页 |
| 4.3.3 纳豆激酶基因缺失对重组菌生长的影响 | 第53-54页 |
| 4.3.4 重组菌纤溶酶活的测定及SDS-PAGE分析 | 第54页 |
| 4.4 小结 | 第54-56页 |
| 第5章 men A基因缺失对重组菌产纳豆激酶的影响 | 第56-64页 |
| 5.1 实验材料 | 第56-57页 |
| 5.1.1 菌种 | 第56页 |
| 5.1.2 试剂 | 第56页 |
| 5.1.3 设备 | 第56页 |
| 5.1.4 培养基 | 第56-57页 |
| 5.2 实验方法 | 第57-60页 |
| 5.2.1 维生素K2 (MK-7)的测定方法 | 第57页 |
| 5.2.2 men A基因的克隆 | 第57-58页 |
| 5.2.3 重组质粒pMD19T-menA△neo的构建 | 第58-59页 |
| 5.2.4 menA基因缺失重组菌的构建 | 第59页 |
| 5.2.5 MK-7对重组菌产纳豆激酶的影响 | 第59-60页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第60-63页 |
| 5.3.1 纳豆芽孢杆菌TN-02发酵产物中MK-7定性分析 | 第60页 |
| 5.3.2 MK-7标准曲线 | 第60-61页 |
| 5.3.3 men A基因的克隆 | 第61页 |
| 5.3.4 men A基因缺失重组菌的构建 | 第61-62页 |
| 5.3.5 MK-7对重组菌TN-022产纳豆激酶的影响 | 第62-63页 |
| 5.4 小结 | 第63-64页 |
| 第6章 结论与展望 | 第64-66页 |
| 结论 | 第64页 |
| 展望 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
