| 摘要 | 第3-6页 |
| abstract | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第16-52页 |
| 1.1 引言 | 第16页 |
| 1.2 结肠癌的发病机理 | 第16-19页 |
| 1.3 结肠癌的发病因素 | 第19-21页 |
| 1.3.1 疾病因素 | 第19-20页 |
| 1.3.2 饮食因素 | 第20页 |
| 1.3.3 年龄及遗传因素 | 第20-21页 |
| 1.4 结肠癌的分子水平特征 | 第21-22页 |
| 1.4.1 基因突变 | 第21页 |
| 1.4.2 染色体水平改变 | 第21页 |
| 1.4.3 信号通路改变 | 第21-22页 |
| 1.5 APC与家族性腺瘤息肉病及结肠癌的发生 | 第22-26页 |
| 1.5.1 APC蛋白结构与功能 | 第23-24页 |
| 1.5.2 APC基因在结肠癌中的突变 | 第24-26页 |
| 1.6 APC与 Asef在结肠癌以及结肠癌细胞迁移中的作用 | 第26-31页 |
| 1.6.1 Asef蛋白结构与功能 | 第27-28页 |
| 1.6.2 APC-Asef的相互作用及激活机制 | 第28-29页 |
| 1.6.3 APC-Asef介导的信号通路 | 第29-31页 |
| 1.7 CK2 激酶与结肠癌细胞侵袭以及增殖的关系 | 第31-39页 |
| 1.7.1 CK2 的结构与功能 | 第31-35页 |
| 1.7.2 APC与 CK2 的关系 | 第35-36页 |
| 1.7.3 CK2 抑制剂的发现 | 第36-39页 |
| 1.8 针对结肠癌的治疗策略 | 第39-50页 |
| 1.8.1 针对结肠癌的干预 | 第40-42页 |
| 1.8.2 针对结肠癌分子水平治疗方法研究进展 | 第42-50页 |
| 1.9 课题研究意义 | 第50-52页 |
| 第二章 材料与方法 | 第52-90页 |
| 2.1 实验材料 | 第52-56页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第52-53页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第53-55页 |
| 2.1.3 实验耗材 | 第55页 |
| 2.1.4 实验菌株 | 第55-56页 |
| 2.1.5 质粒 | 第56页 |
| 2.2 培养基和溶液配制 | 第56-58页 |
| 2.2.1 培养基配制 | 第56-57页 |
| 2.2.2 试剂储存液 | 第57-58页 |
| 2.3 实验方法 | 第58-90页 |
| 2.3.1 质粒构建 | 第58-64页 |
| 2.3.2 蛋白表达与纯化 | 第64-68页 |
| 2.3.3 荧光偏振方法 | 第68-71页 |
| 2.3.4 体外蛋白相互作用的检测 | 第71-74页 |
| 2.3.5 蛋白/多肽共晶结构解析 | 第74-75页 |
| 2.3.6 基于荧光光谱的Asef-GEF活性检测 | 第75-77页 |
| 2.3.7 CK2αADP-Glo?激酶反应 | 第77-79页 |
| 2.3.8 细胞培养 | 第79-81页 |
| 2.3.9 免疫共沉淀检测技术(Co-Immunoprecipitation,Co-IP) | 第81页 |
| 2.3.10 免疫印迹技术 | 第81-84页 |
| 2.3.11 GTPase 活性实验 | 第84页 |
| 2.3.12 细胞迁移(Transwell) | 第84-85页 |
| 2.3.13 MTS 细胞毒性实验 | 第85-86页 |
| 2.3.14 流式细胞分析 | 第86页 |
| 2.3.15 敲除细胞系的建立 | 第86-88页 |
| 2.3.16 划痕实验(Wound healing) | 第88页 |
| 2.3.17 RTCA 实验 | 第88-90页 |
| 第三章 APC/Asef相互作用抑制剂的设计及优化改造 | 第90-120页 |
| 3.1 APC/Asef体外相互作用抑制剂筛选体系的建立 | 第90-96页 |
| 3.1.1 APC(303-739)蛋白的纯化 | 第90-91页 |
| 3.1.2 荧光偏振检测体系的建立 | 第91-96页 |
| 3.2 APC/Asef相互作用口袋分析 | 第96-97页 |
| 3.3 APC/Asef多肽抑制剂结构的改造 | 第97-108页 |
| 3.3.1 多肽抑制剂最小结合基团的确定 | 第97-100页 |
| 3.3.2 多肽的两端封端与否对亲和力的影响 | 第100页 |
| 3.3.3 多肽抑制剂每个位点最适合氨基酸的确定 | 第100-102页 |
| 3.3.4 多肽抑制剂各位点最适氨基酸组合 | 第102-108页 |
| 3.4 多肽抑制剂结构的进一步优化 | 第108-110页 |
| 3.5 拟肽的结构改造与优化 | 第110-112页 |
| 3.6 多肽抑制剂的亲和力测定及体外Asef-GEF活性检测 | 第112-120页 |
| 3.6.1 等温滴定热量检测实验(Isothermal Titration Calorimetry,ITC) | 第112-114页 |
| 3.6.2 热稳定性分析(Thermal Stability Assay,TSA) | 第114-115页 |
| 3.6.3 基于荧光光谱的Asef-GEF活性检测 | 第115-120页 |
| 第四章 肽类抑制剂的分子机制研究 | 第120-134页 |
| 4.1 APC(407-751)蛋白的纯化 | 第120-121页 |
| 4.2 APC与多肽的结晶 | 第121-123页 |
| 4.3 APC(407-751)与MAI-39 复合物的晶体结构分析 | 第123-125页 |
| 4.4 APC(407-751)与MAI-40 复合物的晶体结构分析 | 第125-126页 |
| 4.5 APC(407-751)与MAI-48 复合物的晶体结构分析 | 第126-128页 |
| 4.6 APC(407-751)与MAI-150 复合物的晶体结构分析 | 第128-130页 |
| 4.7 四个共晶结构比对及分析讨论 | 第130-131页 |
| 4.8 APC(407-751)与MAI-203 复合物的晶体结构分析 | 第131页 |
| 4.9 APC与 Asef的突变对结合的影响 | 第131-134页 |
| 第五章 纳米材料包裹肽类抑制剂的细胞功能研究 | 第134-140页 |
| 5.1 肽类抑制剂抑制293T细胞过表达的APC和 Asef相互作用 | 第134-137页 |
| 5.1.1 肽加入细胞裂解液中抑制APC/Asef相互作用 | 第134页 |
| 5.1.2 肽加入细胞培养液中抑制APC/Asef相互作用 | 第134-137页 |
| 5.2 MAI-150 抑制结肠癌细胞SW480 的迁移 | 第137-140页 |
| 5.2.1 MAI-150 抑制结肠癌细胞SW480 的迁移 | 第137-138页 |
| 5.2.2 纳米材料毒性检测 | 第138-140页 |
| 第六章 MAITs抑制剂细胞功能研究 | 第140-164页 |
| 6.1 TAT介导入膜的背景 | 第140-141页 |
| 6.2 TAT肽的优化 | 第141-144页 |
| 6.3 TAT肽入膜的验证 | 第144-150页 |
| 6.4 MAIT-150和MAIT-203 细胞毒性研究 | 第150-152页 |
| 6.5 MAIT-150和MAIT-203 抑制APC/Asef相互作用 | 第152-154页 |
| 6.6 MAIT-150在SW480细胞的CETSA实验 | 第154-155页 |
| 6.7 MAIT-150和MAIT-203抑制结肠癌细胞SW480和HCT116细胞的迁移 | 第155-159页 |
| 6.8 MAIT-203 抑制结肠癌细胞SW480中CDC42 的活性 | 第159-164页 |
| 第七章 CK2α别构抑制剂发现的初步探索 | 第164-174页 |
| 7.1 计算方法发现CK2α上已有的别构口袋 | 第164-165页 |
| 7.2 预测的别构口袋突变分析对CK2α的活性影响 | 第165-170页 |
| 7.2.1 蛋白纯化 | 第165-168页 |
| 7.2.2 活性检测 | 第168-170页 |
| 7.3 预测的别构位点与底物结合位点之间的别构通路 | 第170-172页 |
| 7.4 预测的CK2α别构口袋残基在CMGC激酶家族的保守性 | 第172-174页 |
| 总结与展望 | 第174-176页 |
| 参考文献 | 第176-189页 |
| 致谢 | 第189-191页 |
| 攻读博士期间论文发表情况 | 第191-193页 |
