| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-19页 |
| 1.1 干旱逆境对水稻的影响 | 第11页 |
| 1.2 植物的抗旱机制 | 第11-12页 |
| 1.3 植物抗旱相关基因的发掘 | 第12-14页 |
| 1.3.1 根生长相关抗旱基因 | 第12-13页 |
| 1.3.2 叶发育相关抗旱基因 | 第13页 |
| 1.3.3 逆境应答相关的转录因子 | 第13-14页 |
| 1.4 XHS家族研究进展 | 第14-15页 |
| 1.5 OXHS2的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.6 基因功能研究方法 | 第16-18页 |
| 1.6.1 亚细胞定位 | 第16-17页 |
| 1.6.1.1 基因枪转化法 | 第16-17页 |
| 1.6.1.2 原生质体转化法 | 第17页 |
| 1.6.2 启动子分析 | 第17-18页 |
| 1.7 本研究的目及意义 | 第18-19页 |
| 第二章 OXHS2的启动子分析 | 第19-29页 |
| 2.1 引言 | 第19页 |
| 2.2 实验材料、试剂及仪器 | 第19-20页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第19页 |
| 2.2.2 实验试剂及相关培养基 | 第19-20页 |
| 2.2.2.1 水稻遗传转化培养基配方 | 第19-20页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第20页 |
| 2.3 实验方法 | 第20-24页 |
| 2.3.1 OXHS2_(Promoter)-DX2181表达载体的构建 | 第20-21页 |
| 2.3.1.1 目的基因的获得 | 第20页 |
| 2.3.1.2 OXHS2_(Promoter)-DX2181重组载体的构建 | 第20-21页 |
| 2.3.2 阳性质粒鉴定 | 第21-22页 |
| 2.3.3 启动子表达载体转入农杆菌 | 第22页 |
| 2.3.4 农杆菌介导OXHS2启动子基因的遗传转化 | 第22-23页 |
| 2.3.4.1 水稻中花11愈伤组织的诱导及继代 | 第22页 |
| 2.3.4.2 农杆菌的活化 | 第22页 |
| 2.3.4.3 农杆菌与愈伤组织共培养 | 第22-23页 |
| 2.3.4.4 抗性愈伤的筛选 | 第23页 |
| 2.3.4.5 抗性愈伤的分化 | 第23页 |
| 2.3.4.6 生根及炼苗 | 第23页 |
| 2.3.5 T_0代转基因植株的阳性鉴定 | 第23-24页 |
| 2.3.5.1 T_0代小量提取转基因植株的基因组DNA | 第23-24页 |
| 2.3.5.2 T_0代转基因植株的阳性鉴定 | 第24页 |
| 2.3.6 T_0代阳性植株各组织的荧光观察 | 第24页 |
| 2.4 实验结果 | 第24-28页 |
| 2.4.1 OXHS2启动子功能预测 | 第24-25页 |
| 2.4.1.1 基因OXHS2组织表达模式的芯片数据分析 | 第24-25页 |
| 2.4.1.2 OXHS2启动子顺式元件功能分析 | 第25页 |
| 2.4.2 OXHS2Promoter-DX2181表达载体的构建 | 第25-26页 |
| 2.4.3 根瘤农杆菌的阳性鉴定 | 第26页 |
| 2.4.4 水稻遗传转化 | 第26-27页 |
| 2.4.5 T0代转基因植株的阳性鉴定 | 第27页 |
| 2.4.6 T0代阳性植株各组织GFP荧光观察 | 第27-28页 |
| 2.5 讨论 | 第28-29页 |
| 第三章 OXHS2超表达和干涉植株的胁迫实验 | 第29-36页 |
| 3.1 引言 | 第29页 |
| 3.2 实验材料、试剂及仪器 | 第29页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第29页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第29页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第29页 |
| 3.3 实验方法 | 第29-32页 |
| 3.3.1 OXHS2转基因植株的表达量检测 | 第29-31页 |
| 3.3.1.1 水稻总RNA提取 | 第29-30页 |
| 3.3.1.2 cDNA的合成 | 第30-31页 |
| 3.3.1.3 OXHS2转基因材料的表达检测 | 第31页 |
| 3.3.2 OXHS2超表达和干涉植株幼苗期渗透胁迫实验 | 第31-32页 |
| 3.3.3 OXHS2超表达和干涉植株干旱胁迫实验 | 第32页 |
| 3.4 实验结果与分析 | 第32-35页 |
| 3.4.1 OXHS2超表达和干涉植株表达量分析 | 第32-33页 |
| 3.4.1.1 cDNA质量检测 | 第32页 |
| 3.4.1.2 OXHS2表达量的相对定量分析 | 第32-33页 |
| 3.4.2 幼苗期渗透胁迫实验 | 第33-34页 |
| 3.4.3 苗期干旱胁迫实验 | 第34-35页 |
| 3.5 讨论 | 第35-36页 |
| 第四章 水稻蛋白OXHS2和ZXHS2亚细胞定位及ZXHS2超表达材料的创制 | 第36-46页 |
| 4.1 引言 | 第36页 |
| 4.2 实验材料、试剂及仪器 | 第36-38页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第36页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第36-37页 |
| 4.2.2.1 原生质体提取相关试剂 | 第36-37页 |
| 4.2.2.2 水稻黄化苗MS生根培养基 | 第37页 |
| 4.2.2.3 质粒抽提液 | 第37页 |
| 4.2.3 实验仪器 | 第37-38页 |
| 4.3 实验方法 | 第38-43页 |
| 4.3.1 OXHS2-GFP-HBT瞬时表达载体的构建 | 第38-42页 |
| 4.3.1.1 引物设计 | 第38页 |
| 4.3.1.2 OXHS2目的片段的获得 | 第38-39页 |
| 4.3.1.3 OXHS2-PMD18-T重组载体的构建 | 第39页 |
| 4.3.1.4 连接产物电击转化至DH5α感受态细胞 | 第39页 |
| 4.3.1.5 质粒PCR阳性鉴定 | 第39-40页 |
| 4.3.1.6 OXHS2-GFP-HBT重组载体的构建 | 第40-41页 |
| 4.3.1.7 目的片段与终载体连接 | 第41页 |
| 4.3.1.8 阳性质粒的酶切检测 | 第41页 |
| 4.3.1.9 质粒试剂盒提取 | 第41-42页 |
| 4.3.2 水稻黄化苗原生质体的制备及转化 | 第42-43页 |
| 4.3.2.1 水稻黄化苗的培养 | 第42页 |
| 4.3.2.2 水稻原生质体的制备 | 第42-43页 |
| 4.4 实验结果 | 第43-45页 |
| 4.4.1 OXHS2-GFP-HBT亚细胞定位载体的构建 | 第43页 |
| 4.4.2 OXHS2与嵌合蛋白ZXHS2的亚细胞定位 | 第43-44页 |
| 4.4.3 ZXHS2超表达材料获取 | 第44-45页 |
| 4.5 讨论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-51页 |
| 致谢 | 第51页 |
