| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5页 |
| 第一章 绪论 | 第9-16页 |
| 1.1 长春花 | 第9-11页 |
| 1.1.1 长春花简介 | 第9页 |
| 1.1.2 植物形态 | 第9-10页 |
| 1.1.3 生长习性 | 第10页 |
| 1.1.4 分布范围 | 第10页 |
| 1.1.5 药用价值 | 第10-11页 |
| 1.2 农杆菌 | 第11页 |
| 1.3 毛状根 | 第11页 |
| 1.4 长春花次级代谢产物 | 第11-14页 |
| 1.4.1 长春质碱和阿玛碱 | 第11-12页 |
| 1.4.2 长春花中次生代谢产物合成途径 | 第12-14页 |
| 1.4.3 转运基因CrTPT2 | 第14页 |
| 1.4.4 色谱方法在生物碱分析中的应用 | 第14页 |
| 1.5 研究的主要内容 | 第14-15页 |
| 1.6 研究的目的与意义 | 第15-16页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第16-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第16-24页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第16页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第16-22页 |
| 2.1.3 引物 | 第22页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.5 其他仪器 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-30页 |
| 2.2.1 长春花无菌苗的制备 | 第24页 |
| 2.2.2 农杆菌活化 | 第24页 |
| 2.2.3 农杆菌生长曲线分析 | 第24-25页 |
| 2.2.4 农杆菌的转化 | 第25页 |
| 2.2.5 农杆菌转化鉴定 | 第25-26页 |
| 2.2.6 毛状根诱导条件优化 | 第26-27页 |
| 2.2.7 GUS染色检测 | 第27页 |
| 2.2.8 转化后毛状根RNA的提取 | 第27-28页 |
| 2.2.9 分光光度计检测RNA | 第28页 |
| 2.2.10 琼脂糖凝胶的制备及样品上样 | 第28页 |
| 2.2.11 反转录cDNA的合成 | 第28-29页 |
| 2.2.12 基因表达量的检测 | 第29-30页 |
| 2.2.13 长春花毛状根中次级代谢产物长春质碱和阿玛碱检测 | 第30页 |
| 2.3 分析方法 | 第30-32页 |
| 2.3.1 毛状根诱导中数据分析方法 | 第30-31页 |
| 2.3.2 实时荧光定量PCR数据分析方法 | 第31页 |
| 2.3.3 HPLC检测数据分析方法 | 第31-32页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第32-46页 |
| 3.1 长春花无菌苗的制备 | 第32-33页 |
| 3.2 发根农杆菌C58C1以及发根农杆菌ATCC15834生长曲线 | 第33页 |
| 3.3 最优农杆菌侵染诱导毛状根方案 | 第33-35页 |
| 3.4 GUS染色检测 | 第35页 |
| 3.5 农杆菌的转化鉴定结果 | 第35-37页 |
| 3.6 转化后农杆菌诱导毛状根结果 | 第37-38页 |
| 3.7 实时荧光定量PCR分析目的基因在长春花转基因毛状根中表达量 | 第38-40页 |
| 3.8 液相检测转基因毛状根中长春质碱与阿玛碱含量 | 第40-46页 |
| 3.8.1 长春质碱与阿玛碱标准品高效液相检测 | 第40-42页 |
| 3.8.2 长春花毛状根中阿玛碱和长春质碱含量检测 | 第42-46页 |
| 第四章 结论与展望 | 第46-48页 |
| 4.1 结论 | 第46-47页 |
| 4.2 展望 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 附录 A | 第52-53页 |
| A.1.荧光实时定量PCR中溶解曲线图 | 第52-53页 |
| A.2.诱导的毛状根补图 | 第53页 |
