| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-15页 |
| 符号说明及缩略词 | 第15-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-46页 |
| ·纤维素酶 | 第17-25页 |
| ·纤维素酶系的组成和存在形式 | 第17-18页 |
| ·纤维素酶基因的克隆 | 第18-21页 |
| ·纤维素酶基因的异源表达 | 第21-25页 |
| ·丝状真菌纤维素酶的表达调控研究进展 | 第25-33页 |
| ·纤维素酶合成的诱导机制 | 第25-26页 |
| ·碳源对丝状真菌纤维素酶基因表达的影响 | 第26-29页 |
| ·纤维素酶合成的表达调控因子 | 第29-33页 |
| ·丝状真菌蛋白质组学研究进展 | 第33-44页 |
| ·蛋白质组学研究技术 | 第33-38页 |
| ·丝状真菌蛋白质组学研究现状 | 第38-43页 |
| ·丝状真菌蛋白质组学研究展望 | 第43-44页 |
| ·本研究的目的与主要工作内容 | 第44-46页 |
| 第二章 斜卧青霉内切葡聚糖酶基因的克隆和表达 | 第46-80页 |
| 引言 | 第46页 |
| ·材料和方法 | 第46-62页 |
| ·菌株和质粒 | 第46-47页 |
| ·培养基和培养方法 | 第47页 |
| ·常用储备液及缓冲液 | 第47-48页 |
| ·试剂,工具酶与仪器 | 第48-49页 |
| ·基因组DNA的提取与定量 | 第49-50页 |
| ·总RNA的提取及cDNA的合成 | 第50-51页 |
| ·简并引物设计与基因片段克隆 | 第51-52页 |
| ·TAIL-PCR扩增基因5’端和3’端 | 第52-54页 |
| ·高保真扩增基因全长和cDNA全序列 | 第54页 |
| ·克隆、测序与序列分析 | 第54页 |
| ·Southern杂交 | 第54-56页 |
| ·实时荧光定量PCR分析cel7B和cel5A的转录 | 第56-58页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第58-59页 |
| ·酿酒酵母的转化 | 第59页 |
| ·内切葡聚糖酶活性测定 | 第59-60页 |
| ·来源于酿酒酵母重组蛋白的分离纯化 | 第60页 |
| ·蛋白质电泳和活性染色 | 第60-61页 |
| ·重组蛋白分子量的确定 | 第61页 |
| ·重组蛋白的去糖基化 | 第61页 |
| ·pH和温度对酶活力的影响 | 第61-62页 |
| ·重组Cel7B和Cel5A的底物特异性分析 | 第62页 |
| ·结果与分析 | 第62-78页 |
| ·基因组DNA的质量 | 第62-63页 |
| ·斜卧青霉cel5A基因的克隆及序列分析 | 第63-66页 |
| ·斜卧青霉cel7B基因的克隆及序列分析 | 第66-68页 |
| ·cel5A和cel7B拷贝数的确定 | 第68-70页 |
| ·cel5A cel7B基因转录分析 | 第70-71页 |
| ·重组表达载体pAJ401-cel5A和pAJ401-cel7B的构建 | 第71页 |
| ·重组酶的纯化 | 第71-73页 |
| ·重组酶的酶学性质 | 第73-78页 |
| ·讨论 | 第78-79页 |
| 小结 | 第79-80页 |
| 第三章 野生菌株与突变菌株纤维素降解酶系基因转录差异分析 | 第80-96页 |
| 引言 | 第80-81页 |
| ·材料和方法 | 第81-84页 |
| ·菌株、质粒和引物 | 第81-82页 |
| ·培养基和培养方法 | 第82页 |
| ·常用缓冲液、试剂和设备 | 第82-83页 |
| ·标准曲线的制作 | 第83-84页 |
| ·斜卧青霉RNA的提取 | 第84页 |
| ·cDNA的合成 | 第84页 |
| ·纤维素酶和半纤维酶基因的RT-qPCR分析 | 第84页 |
| ·结果与分析 | 第84-93页 |
| ·总RNA提取质量 | 第84-85页 |
| ·RT-qPCR标准曲线的制作 | 第85-86页 |
| ·RT-qPCR定量结果的有效性分析 | 第86页 |
| ·不同碳源对斜卧青霉114-2纤维素酶和半纤维素酶基因转录的影响 | 第86-88页 |
| ·不同碳源对斜卧青霉JU-A10-S纤维素酶和半纤维素酶基因转录的影响 | 第88-90页 |
| ·微晶纤维素和乳糖诱导作用的区别 | 第90-92页 |
| ·野生菌株114-2和突变菌株JU-A10-S基因转录差异 | 第92-93页 |
| ·讨论 | 第93-95页 |
| 小结 | 第95-96页 |
| 第四章 斜卧青霉胞外差异蛋白质组研究 | 第96-143页 |
| 引言 | 第96-97页 |
| ·材料和方法 | 第97-105页 |
| ·菌株 | 第97页 |
| ·培养基和培养方法 | 第97页 |
| ·常用储备液和缓冲液 | 第97-98页 |
| ·试剂和仪器 | 第98-99页 |
| ·胞外蛋白浓度及酶活测定 | 第99-100页 |
| ·胞外蛋白质的提取 | 第100页 |
| ·2D-DIGE蛋白质含量测定 | 第100页 |
| ·荧光染料预标记 | 第100-101页 |
| ·二维凝胶电泳(银染)聚焦程序优化及各样本的蛋白点分布范围观察 | 第101-102页 |
| ·2DE-DIGE实验设计 | 第102-104页 |
| ·考染双向电泳 | 第104页 |
| ·质谱分析样品的制备 | 第104-105页 |
| ·MALDI-TOF-TOF串联质谱分析 | 第105页 |
| ·结果和分析 | 第105-139页 |
| ·野生菌株114-2与突变菌株JU-A10-T胞外蛋白浓度及酶活比较 | 第105-110页 |
| ·蛋白定量结果和准确性验证 | 第110页 |
| ·荧光染料标记效果检测 | 第110-111页 |
| ·二维凝胶电泳(银染)条件优化 | 第111-113页 |
| ·2D-DIGE重现性分析 | 第113页 |
| ·差异蛋白质点的分析 | 第113-116页 |
| ·蛋白质点的鉴定和分类 | 第116-124页 |
| ·野生菌株114-2在两种培养条件下的胞外蛋白差异分析 | 第124-135页 |
| ·突变菌株JU-A10-T在两种培养条件下的胞外蛋白差异分析 | 第135-137页 |
| ·野生菌株114-2和突变菌株JU-A10-T在葡萄糖培养条件下的胞外蛋白差异分析 | 第137-138页 |
| ·野生菌株114-2和突变菌株JU-A10-T在微晶纤维素与麦麸培养条件下的胞外蛋白差异分析 | 第138-139页 |
| ·讨论 | 第139-141页 |
| 小结 | 第141-143页 |
| 第五章 斜卧青霉α-甘露糖苷酶基因和丝氨酸蛋白激酶基因的敲除 | 第143-160页 |
| 引言 | 第143-144页 |
| ·材料和方法 | 第144-149页 |
| ·菌株和质粒 | 第144页 |
| ·培养基 | 第144页 |
| ·常用缓冲液、试剂与仪器 | 第144-145页 |
| ·敲除盒的构建 | 第145-146页 |
| ·原生质体的制备及转化 | 第146-147页 |
| ·斜卧青霉转化子的染色体基因组小量提取 | 第147-148页 |
| ·敲除子筛选 | 第148页 |
| ·蛋白浓度及酶活测定 | 第148-149页 |
| ·结果与分析 | 第149-157页 |
| ·敲除载体的构建 | 第149-151页 |
| ·原生质体转化及敲除子的鉴定 | 第151-154页 |
| ·敲除子与出发菌株的形态学比较 | 第154页 |
| ·敲除株的蛋白浓度及酶活测定 | 第154-157页 |
| ·讨论 | 第157-159页 |
| 小结 | 第159-160页 |
| 全文总结与展望 | 第160-162页 |
| 1 本文取得的创新性成果 | 第160页 |
| 2 本论文存在的问题及深入方向 | 第160-162页 |
| 参考文献 | 第162-184页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第184-185页 |
| 致谢 | 第185-186页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第186-187页 |
| 附录 | 第187-209页 |
