| 摘要 | 第1-14页 |
| Abstract | 第14-19页 |
| 符号说明及缩写词 | 第19-20页 |
| 第一章 研究背景和立题依据 | 第20-42页 |
| ·研究背景 | 第20-40页 |
| ·褐藻酸 | 第20-25页 |
| ·褐藻酸来源与结构 | 第20-22页 |
| ·褐藻酸的理化性质 | 第22-23页 |
| ·褐藻酸的应用 | 第23-25页 |
| ·褐藻酸裂解酶 | 第25-40页 |
| ·分类 | 第25-29页 |
| ·作用机制 | 第29页 |
| ·来源与酶学性质 | 第29-33页 |
| ·基因工程研究 | 第33-34页 |
| ·结构与功能分析 | 第34-38页 |
| ·生物学功能与应用 | 第38-40页 |
| ·题依据与研究内容 | 第40-42页 |
| ·立题依据 | 第40页 |
| ·研究内容 | 第40-42页 |
| 第二章 褐藻酸裂解酶产生菌株的筛选与鉴定 | 第42-56页 |
| ·引言 | 第42页 |
| ·材料与方法 | 第42-49页 |
| ·材料 | 第42-44页 |
| ·样品 | 第42页 |
| ·菌株与质粒 | 第42-43页 |
| ·培养基 | 第43页 |
| ·主要试剂 | 第43-44页 |
| ·主要仪器 | 第44页 |
| ·数据库及软件 | 第44页 |
| ·方法 | 第44-49页 |
| ·样品处理 | 第44-45页 |
| ·菌株筛选方法 | 第45页 |
| ·酶活测定 | 第45-46页 |
| ·菌株形态与生理特征分析 | 第46页 |
| ·16S rDNA克隆与测序 | 第46-49页 |
| ·结果与分析 | 第49-53页 |
| ·菌株筛选 | 第49-51页 |
| ·菌株SM0524的表型和生理特征 | 第51页 |
| ·菌株SM0524的形态特征 | 第51页 |
| ·菌株SM0524的碳源利用情况 | 第51页 |
| ·菌株SM0524的16S rDNA克隆与序列分析以及菌株种属鉴定 | 第51-53页 |
| ·讨论 | 第53-56页 |
| 第三章 Pseudoalteromonas sp.SM0524分泌的褐藻酸裂解酶的分离纯化和性质研究 | 第56-73页 |
| ·引言 | 第56页 |
| ·材料与方法 | 第56-60页 |
| ·材料 | 第56-58页 |
| ·菌株与培养基 | 第56-57页 |
| ·主要试剂耗材 | 第57页 |
| ·主要仪器 | 第57-58页 |
| ·实验方法 | 第58-60页 |
| ·酶活测定 | 第58页 |
| ·总蛋白含量测定 | 第58页 |
| ·凝胶电泳SDS-PAGE | 第58页 |
| ·酶的分离纯化 | 第58-59页 |
| ·酶学性质研究 | 第59-60页 |
| ·酶解产物分析 | 第60页 |
| ·结果与分析 | 第60-70页 |
| ·P.sp.SM0524分泌的褐藻酸裂解酶的分离纯化 | 第60-63页 |
| ·离子交换层析 | 第60-62页 |
| ·凝胶过滤层析 | 第62-63页 |
| ·褐藻酸裂解酶的纯度和得率分析 | 第63页 |
| ·P.sp.SM0524分泌的褐藻酸裂解酶的酶学性质 | 第63-68页 |
| ·最适酶活温度和酶的热稳定性 | 第63页 |
| ·最适酶活pH和pH稳定性 | 第63-65页 |
| ·金属离子对酶活的影响 | 第65页 |
| ·NaCl对酶活的影响 | 第65-66页 |
| ·底物特异性研究 | 第66-68页 |
| ·酶解产物分析 | 第68-70页 |
| ·讨论 | 第70-73页 |
| 第四章 Pseudoalteromonas sp.SM0524褐藻酸裂解酶基因克隆和序列分析 | 第73-86页 |
| ·引言 | 第73页 |
| ·材料与方法 | 第73-77页 |
| ·菌株与质粒 | 第73-74页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第74页 |
| ·数据库及分析软件 | 第74页 |
| ·褐藻酸裂解酶N端测序 | 第74页 |
| ·褐藻酸裂解酶的MALDI-TOF-MS分析 | 第74-75页 |
| ·基因克隆 | 第75-76页 |
| ·引物设计 | 第75页 |
| ·总DNA提取 | 第75页 |
| ·酶基因克隆 | 第75页 |
| ·PCR产物的回收纯化 | 第75页 |
| ·E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第75-76页 |
| ·质粒转化E.coli DH5α | 第76页 |
| ·转化子筛选 | 第76页 |
| ·基因测序 | 第76页 |
| ·褐藻酸裂解酶序列分析和同源模建 | 第76-77页 |
| ·结果与分析 | 第77-84页 |
| ·褐藻酸裂解酶的N端测序 | 第77页 |
| ·褐藻酸裂解酶的MALDI-TOF-MS分析 | 第77-78页 |
| ·P.sp.SM0524的褐藻酸裂解酶基因克隆 | 第78-80页 |
| ·引物设计 | 第78页 |
| ·基因克隆 | 第78-80页 |
| ·P.sp.SM0524的褐藻酸裂解酶基因序列分析 | 第80-84页 |
| ·褐藻酸裂解酶基因aly-SJ01序列分析 | 第80-82页 |
| ·褐藻酸裂解酶ALY-SJ01的同源模建与结构分析 | 第82页 |
| ·褐藻酸裂解酶基因aly-SJ02序列分析 | 第82-84页 |
| ·褐藻酸裂解酶ALY-SJ02的同源模建与结构分析 | 第84页 |
| ·讨论 | 第84-86页 |
| 第五章 Pseudoalteromonas sp.SM0524褐藻酸裂解酶基因aly-SJ01的重组表达和重组酶性质研究 | 第86-101页 |
| ·引言 | 第86-87页 |
| ·材料和方法 | 第87-90页 |
| ·菌株和质粒 | 第87页 |
| ·培养基 | 第87页 |
| ·主要试剂 | 第87页 |
| ·主要仪器 | 第87页 |
| ·aly-SJ01在E.coli中的表达 | 第87-90页 |
| ·表达引物设计 | 第87-88页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第88页 |
| ·表达载体的构建 | 第88-89页 |
| ·E.coli BL21(DE3)异源表达aly-SJ01基因 | 第89页 |
| ·重组酶的诱导表达与纯化 | 第89-90页 |
| ·Aly-SJ01重组酶性质研究 | 第90页 |
| ·Aly-SJ01酶解产物分析 | 第90页 |
| ·结果与分析 | 第90-99页 |
| ·褐藻酸裂解酶Aly-SJ01的重组表达和纯化 | 第90-94页 |
| ·无信号肽序列的aly-SJ01基因的克隆和序列验证 | 第90页 |
| ·表达载体的构建 | 第90-92页 |
| ·aly-SJ01基因的异源表达 | 第92页 |
| ·Aly-SJ01重组酶的纯化 | 第92-94页 |
| ·Aly-SJ01重组酶性质研究 | 第94-98页 |
| ·最适温度和p H | 第94页 |
| ·Aly-SJ01的热稳定性 | 第94-95页 |
| ·金属离子、SDS和EDTA对Aly-SJ01酶活的影响 | 第95页 |
| ·NaCl浓度对Aly-SJ01活性的影响 | 第95页 |
| ·Aly-SJ01的底物特异性分析 | 第95-97页 |
| ·Aly-SJ01的催化动力学参数 | 第97-98页 |
| ·Aly-SJ01的变性温度 | 第98页 |
| ·Aly-SJ01酶解产物分析 | 第98-99页 |
| ·讨论 | 第99-101页 |
| 第六章 Pseudoalteromonas sp.SM0524的褐藻酸裂解酶基因aly-SJ02的重组表达和重组酶性质研究 | 第101-109页 |
| ·引言 | 第101页 |
| ·材料和方法 | 第101-105页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第101页 |
| ·菌株和质粒 | 第101页 |
| ·培养基 | 第101页 |
| ·褐藻酸裂解酶基因aly-SJ02在大肠杆菌中的表达 | 第101-103页 |
| ·表达引物设计 | 第101-102页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第102页 |
| ·表达载体的构建 | 第102-103页 |
| ·E coli BL21(DE3)异源表达aly-SJ02基因 | 第103页 |
| ·重组酶Aly-SJ02的诱导表达 | 第103页 |
| ·重组酶Aly-SJ02的纯化 | 第103-104页 |
| ·离子交换层析 | 第103-104页 |
| ·镍亲和层析 | 第104页 |
| ·Aly-SJ02的酶学性质 | 第104-105页 |
| ·pH对重组酶Aly-SJ02活性的影响 | 第104页 |
| ·温度对重组酶Aly-SJ02活性的影响 | 第104页 |
| ·金属离子和蛋白酶抑制剂对重组酶Aly-SJ02活性的影响 | 第104-105页 |
| ·结果与分析 | 第105-107页 |
| ·aly-SJ02在E.coli BL21(DE3)中的表达 | 第105页 |
| ·重组酶Aly-SJ02的纯化 | 第105页 |
| ·重组表达的Aly-SJ02的酶学性质 | 第105-107页 |
| ·最适反应pH | 第105-106页 |
| ·最适酶活温度 | 第106-107页 |
| ·讨论 | 第107-109页 |
| 全文总结与展望 | 第109-111页 |
| 参考文献 | 第111-123页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第123-124页 |
| 致谢 | 第124-125页 |
| 附录 | 第125-140页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第140页 |
