| 致谢 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-26页 |
| 第一节 双生病毒分类及基因组结构研究进展 | 第12-15页 |
| 1 双生病毒的分类及基因组结构 | 第12-15页 |
| ·玉米线条病毒属 | 第12-13页 |
| ·甜菜曲顶病毒属 | 第13页 |
| ·番茄伪曲顶病毒属 | 第13页 |
| ·菜豆金色花叶病毒属 | 第13-15页 |
| 第二节 病毒编码的RNA沉默抑制子研究进展 | 第15-26页 |
| 1 RNA沉默简介 | 第15页 |
| 2 病毒编码的RNA沉默抑制子 | 第15-17页 |
| 3 RNA沉默抑制子的鉴定方法 | 第17-19页 |
| ·农杆菌共浸润法 | 第17-18页 |
| ·RNA沉默逆转法 | 第18页 |
| ·稳定表达法和嫁接法 | 第18-19页 |
| 4 病毒编码的RNA沉默抑制的分子作用机理 | 第19-24页 |
| ·HC-Pro的分子作用机理 | 第20页 |
| ·CMV 2b的分子作用机理 | 第20-22页 |
| ·P19的分子作用机理 | 第22-24页 |
| 5 双生病毒编码的RNA沉默抑制子 | 第24页 |
| 6 病毒编码的RNA沉默抑制子的应用 | 第24-26页 |
| 第二章 中国番茄黄化曲叶病毒AV2基因的原核表达及多克隆抗体制备 | 第26-34页 |
| 1 材料与方法 | 第26-31页 |
| ·质粒载体及菌株 | 第26页 |
| ·酶及生化试剂 | 第26页 |
| ·TYLCCNV Y10AV2基因的克隆 | 第26-28页 |
| ·TYLCCNV Y10 AV2基因原核表达质粒的构建 | 第28页 |
| ·TYLCCNV Y10 AV2基因的诱导表达、纯化及融合蛋白的鉴定 | 第28页 |
| ·SDS-PAGE和Western blot | 第28-30页 |
| ·重组蛋白的多抗血清的制备 | 第30-31页 |
| 2 结果与分析 | 第31-33页 |
| ·TYLCCNV Y10 AV2基因的克隆及序列分析 | 第31页 |
| ·TYLCCNV Y10 AV2基因原核表达载体的构建及重组蛋白的表达、纯化 | 第31-33页 |
| ·抗血清的效价 | 第33页 |
| 3 讨论 | 第33-34页 |
| 第三章 中国番茄黄化曲叶病毒AV2基因功能研究 | 第34-51页 |
| 1 材料与方法 | 第34-41页 |
| ·植物材料、质粒载体、菌株及抗体 | 第34-35页 |
| ·载体构建 | 第35-38页 |
| ·农杆菌共浸润接种 | 第38页 |
| ·GFP荧光观察和拍照 | 第38页 |
| ·植物可溶性总蛋白样品的制备 | 第38页 |
| ·SDS-PAGE和Western blot | 第38页 |
| ·RNA大量提取和Northern blot分析 | 第38-41页 |
| ·沉默抑制子抑制信号传导的浸润方法 | 第41页 |
| ·AV2蛋白的亚细胞定位 | 第41页 |
| 2 结果与分析 | 第41-49页 |
| ·TYLCCNV编码的AV2蛋白能抑制GFP 16c转基因本氏烟的局部沉默 | 第41-43页 |
| ·TYLCCNV Y10编码的AV2蛋白能抑制GFP 16c转基因本氏烟的GFP基因系统沉默 | 第43-44页 |
| ·TYLCCNV Y10编码的AV2蛋白能抑制GFP 16c本氏烟的GFP基因系统沉默信号的传导 | 第44-45页 |
| ·TYLCCNV Y10编码的AV2蛋白不能抑制GFP 16c转基因本氏烟中短距离沉默信号的传导 | 第45-46页 |
| ·TYLCCNV Y10编码的AV2蛋白在本氏烟叶片表皮细胞中的亚细胞定位 | 第46-47页 |
| ·TYLCCNV Y10编码的AV2蛋白在PVX异源表达系统中是症状决定因子 | 第47-49页 |
| 3 讨论 | 第49-51页 |
| 附 齿兰环斑病毒多克隆抗体制备及应用 | 第51-61页 |
| 1.材料与方法 | 第51-54页 |
| ·病毒、质粒载体及菌株 | 第51页 |
| ·酶及生化试剂 | 第51-52页 |
| ·ORSV外壳蛋白基因(CP)的克隆 | 第52页 |
| ·ORSV CP基因原核表达载体的构建 | 第52页 |
| ·ORSV CP基因的诱导表达、纯化及融合蛋白的鉴定 | 第52-53页 |
| ·重组蛋白的多抗血清的制备 | 第53页 |
| ·Dot-blot ELISA检测方法的建立及检测应用 | 第53页 |
| ·免疫捕获反转录PCR(IC-RT-PCR)的建立及检测应用 | 第53-54页 |
| 2 结果与分析 | 第54-59页 |
| ·ORSV CP基因的克隆及序列分析 | 第54-55页 |
| ·ORSV CP基因原核表达载体的构建及重组蛋白的表达、纯化 | 第55-56页 |
| ·抗血清的效价和特异性 | 第56-57页 |
| ·Dot-blot ELISA的建立及检测ORSV应用 | 第57页 |
| ·检测ORSV的IC-RT-PCR方法的建立及应用 | 第57-59页 |
| 3 讨论 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 附录A:本论文所用病毒缩写及中英文对照 | 第68-69页 |
| 附录B 本论文中所用术语缩写与中英文对照 | 第69-70页 |
| 附录C 常用缓冲液及培养基配方 | 第70-76页 |
| 附录D 常用生化及分子生物学试剂与仪器 | 第76-78页 |
| 作者简历 | 第78页 |
