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稻瘟病菌相关致病基因MMI1的功能分析

致谢第1-8页
摘要第8-9页
ABSTRACT第9-12页
一.文献综述第12-26页
   ·稻瘟病与稻瘟病菌第12页
   ·稻瘟病菌的侵染循环第12-13页
   ·稻瘟病菌的细胞自噬研究第13-16页
     ·细胞自噬的类型第14-15页
     ·细胞巨自噬的过程第15页
     ·细胞自噬的形态学特征第15页
     ·细胞自噬的作用第15-16页
     ·细胞自噬过程对稻瘟病菌的影晌第16页
   ·真菌中凋亡类似的细胞程序性死亡第16-26页
     ·细胞凋亡的特点及检测第17-18页
     ·细胞凋亡在真菌中的作用第18-19页
     ·诱导真菌凋亡的条件第19-20页
     ·真菌凋亡网络与哺乳动物的区别第20-21页
     ·真菌凋亡基因的功能分析第21-25页
     ·MM11基因第25-26页
二.材料与方法第26-42页
   ·菌株、质粒与培养条件第26页
   ·培养基的配制第26-29页
     ·CM培养基第26-28页
     ·LB培养基第28页
     ·抗生素的配制第28页
     ·农杆菌诱导培养基AIM配方第28-29页
   ·常规分子生物学实验技术第29-40页
     ·PCR反应第29-30页
     ·酶切反应第30页
     ·酶切片段的去磷酸化(CIP)第30页
     ·DNA的琼脂糖电泳第30-31页
     ·DNA片段的凝胶回收第31-32页
     ·连接反应第32页
     ·大肠杆菌感受态细胞制备第32-33页
     ·大肠杆菌转化第33-34页
     ·农杆菌的冻融法转化第34页
     ·稻瘟病菌的T-DNA转化第34-35页
     ·CTAB法提取质粒DNA第35-36页
     ·基因组DNA提取(Talbot et al.,1993)第36-37页
     ·Southern杂交第37-40页
   ·突变子的表型分析第40-42页
     ·生长速度与产孢量第40页
     ·孢子萌发观察第40页
     ·致病性测定第40-42页
三.结果分析第42-59页
   ·载体构建第42-50页
     ·MMI1基因的确定第42-46页
     ·MMI1基因敲除载体的构建思路第46页
     ·载体构建思路第46-47页
     ·基因上游和下游片断的PCR扩增与克隆第47-48页
     ·基因上下游片段与pBS-HPH1载体的连接和酶切第48页
     ·MMI1基因的ATMT转化(Rho HS et al,2001)第48-49页
     ·转化子的PCR验证和Southern杂交分析第49-50页
   ·突变体△MMI1表型分析第50-59页
     ·突变体形态观察和生长速度测定第50-53页
     ·突变体△MMI1的产孢量下降第53-54页
     ·△MMI1突变体对H_2O_2和苯菌灵的敏感性第54-56页
     ·孢子萌发和附着孢形成率比较第56页
     ·突变体致病性测定第56-59页
四.讨论与总结第59-61页
五.参考文献第61-68页

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