| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第一章 前言 | 第9-19页 |
| ·引言 | 第9-10页 |
| ·C.glutamicum中L-苏氨酸的代谢途径 | 第10-11页 |
| ·L-苏氨酸生物合成途径 | 第10页 |
| ·L-苏氨酸的降解代谢途径 | 第10页 |
| ·L-苏氨酸的跨膜转运系统 | 第10-11页 |
| ·C.glutamicum L-苏氨酸合成的调控机制 | 第11-13页 |
| ·前导肽介导的转录衰减机制 | 第11-12页 |
| ·合成途径酶的反馈抑制机制 | 第12-13页 |
| ·C.glutamicum L-苏氨酸基因工程菌研究进展 | 第13-15页 |
| ·高效表达L-苏氨酸合成途径关键酶 | 第13-14页 |
| ·减少L-苏氨酸胞内降解 | 第14页 |
| ·提高L-苏氨酸向胞外分泌能力 | 第14-15页 |
| ·L-苏氨酸代谢工程研究趋势 | 第15-17页 |
| ·运用系统生物学方法提高产量 | 第15-16页 |
| ·提高菌株稳定性 | 第16页 |
| ·扩展底物利用范围 | 第16-17页 |
| ·立题背景与意义 | 第17-18页 |
| ·论文研究内容 | 第18-19页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第19-26页 |
| ·实验材料 | 第19-22页 |
| ·菌株和质粒 | 第19-20页 |
| ·引物 | 第20-21页 |
| ·培养基 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·仪器设备 | 第21-22页 |
| ·实验方法 | 第22-26页 |
| ·菌体培养及发酵 | 第22页 |
| ·DNA的制备 | 第22-23页 |
| ·表达质粒和菌株的构建 | 第23-24页 |
| ·天冬氨酸激酶的活性测定及纯化 | 第24页 |
| ·高丝氨酸脱氢酶的活性测定 | 第24-25页 |
| ·检测及分析方法 | 第25-26页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第26-46页 |
| ·表达质粒和工程菌株的构建 | 第26-27页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第26页 |
| ·表达质粒的构建及酶切验证 | 第26-27页 |
| ·工程菌株的构建 | 第27页 |
| ·lysC~M突变位点的确定、分析及其活性测定 | 第27-34页 |
| ·lysC~M的突变位点 | 第27-28页 |
| ·基于蛋白结构分析lysC~M突变对解除天冬氨酸激酶受反馈抑制调节的影响 | 第28-31页 |
| ·lysC、lysC~M在E coli BL21中的诱导表达 | 第31-32页 |
| ·天冬氨酸激酶的纯化 | 第32-33页 |
| ·天冬氨酸激酶野生型和突变型酶活比较 | 第33-34页 |
| ·结论 | 第34页 |
| ·hom~M突变位点的确定、分析及其活性测定 | 第34-38页 |
| ·hom~M-thrB的突变位点 | 第35页 |
| ·hom~M突变的分析 | 第35-36页 |
| ·hom-thrB在E coli BL21中的诱导表达 | 第36页 |
| ·高丝氨酸脱氢酶的酶活 | 第36-37页 |
| ·结论 | 第37-38页 |
| ·lysC~M、hom~M-thrB的表达对L-苏氨酸积累的影响 | 第38-44页 |
| ·lysC~M、hom~M-thrB在pDXW-8上的表达情况 | 第38页 |
| ·过表达lysC和hom-thrB | 第38-39页 |
| ·过表达lysC~M | 第39-40页 |
| ·过表达hom-thrB | 第40-42页 |
| ·过表达lysC~M和hom~M-thrB | 第42-43页 |
| ·结论 | 第43-44页 |
| ·工程菌株13869-3的发酵条件优化 | 第44-46页 |
| ·控制溶氧 | 第44-45页 |
| ·控制糖浓度 | 第45-46页 |
| 第四章 主要结论与展望 | 第46-48页 |
| ·主要结论 | 第46-47页 |
| ·展望 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第54页 |
