| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第11-14页 |
| 第1章 文献综述 | 第14-27页 |
| 1.1 猪δ冠状病毒(PDCoV)简介 | 第14-18页 |
| 1.1.1 PDCoV病原特征及理化特性 | 第14-15页 |
| 1.1.2 PDCoV基因组结构及其编码蛋白 | 第15-18页 |
| 1.1.3 PDCoV的流行病学 | 第18页 |
| 1.2 抗病毒天然免疫 | 第18-26页 |
| 1.2.1 模式识别受体(PRRs) | 第19-22页 |
| 1.2.2 模式识别受体(PRRs)介导的信号转导 | 第22-25页 |
| 1.2.3 IFN-β转录激活机制 | 第25-26页 |
| 1.3 冠状病毒逃避天然免疫机制 | 第26-27页 |
| 第2章 研究目的和意义 | 第27-28页 |
| 第3章 材料和方法 | 第28-45页 |
| 3.1 实验材料 | 第28-32页 |
| 3.1.1 细胞、毒株与菌株 | 第28页 |
| 3.1.2 载体与质粒 | 第28-29页 |
| 3.1.3 工具酶及主要试剂 | 第29页 |
| 3.1.4 Westernblot实验所需材料 | 第29页 |
| 3.1.5 培养基及其配制 | 第29-30页 |
| 3.1.6 主要缓冲液与相关试剂及其配制 | 第30-32页 |
| 3.1.7 主要实验仪器及设备 | 第32页 |
| 3.1.8 分子生物学分析软件 | 第32页 |
| 3.2 实验方法 | 第32-45页 |
| 3.2.1 RNA的提取 | 第32-33页 |
| 3.2.2 RNA含量及纯度评价标准 | 第33页 |
| 3.2.3 cDNA的合成 | 第33-34页 |
| 3.2.4 SYBRGreenI实时荧光定量PCR | 第34-35页 |
| 3.2.5 相对mRNA表达水平的计算 | 第35页 |
| 3.2.6 野生型nsp10及其突变体真核表达质粒的构建 | 第35-36页 |
| 3.2.7 PCR产物检测 | 第36-37页 |
| 3.2.8 PCR产物回收纯化 | 第37页 |
| 3.2.9 PCR回收产物的酶切、回收及连接 | 第37-39页 |
| 3.2.10 大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第39页 |
| 3.2.11 连接产物的转化 | 第39-40页 |
| 3.2.12 重组质粒的制备与鉴定 | 第40页 |
| 3.2.13 质粒的转染(脂质体介导的瞬时转染法) | 第40-41页 |
| 3.2.14 双荧光素酶报告基因检测 | 第41页 |
| 3.2.15 Westernblot实验 | 第41-43页 |
| 3.2.16 免疫共沉淀 | 第43页 |
| 3.2.17 间接免疫荧光实验与激光共聚焦显微镜观察 | 第43-44页 |
| 3.2.18 统计学方法 | 第44-45页 |
| 第4章 结果和分析 | 第45-55页 |
| 4.1 PDCoVnsp10真核表达质粒的构建 | 第45页 |
| 4.2 PDCoVnsp10抑制SeV诱导的IFN-β产生 | 第45-47页 |
| 4.2.1 PDCoVnsp10抑制SeV诱导的IFN-β启动子活性 | 第46页 |
| 4.2.2 PDCoVnsp10抑制SeV诱导的IFN-βmRNA的表达 | 第46-47页 |
| 4.3 PDCoVnsp10抑制SeV诱导的IRF3和NF-κB活化 | 第47-49页 |
| 4.3.1 PDCoVnsp10抑制SeV诱导的IRF3和NF-κB启动子激活 | 第47-48页 |
| 4.3.2 PDCoVnsp10抑制SeV诱导的IRF3和p65的磷酸化和入核 | 第48-49页 |
| 4.4 PDCoVnsp10抑制RIG-I/MAD5介导的IFN信号通路 | 第49-50页 |
| 4.5 PDCoVnsp10与RIG-I、MDA5、TRIM25、TRIM65之间的相互作用情况 | 第50-51页 |
| 4.6 PDCoVnsp10蛋白抑制IFN-β产生的关键区域分析 | 第51-55页 |
| 4.6.1 不同冠状病毒的nsp10蛋白氨基酸序列比对 | 第51-52页 |
| 4.6.2 PDCoVnsp10及其截短突变体抑制SeV诱导的IFN-β产生 | 第52-54页 |
| 4.6.3 PDCoVnsp10及其点突变体抑制SeV诱导的IFN-β产生 | 第54-55页 |
| 第5章 讨论与结论 | 第55-62页 |
| 5.1 讨论 | 第55-61页 |
| 5.1.1 PDCoVnsp10抑制IFN-β产生的初步探究 | 第56-57页 |
| 5.1.2 PDCoVnsp10抑制IFN-β产生的关键区域的初步探究 | 第57-58页 |
| 5.1.3 PDCoVnsp10抑制Ⅰ型IFN信号转导机制的初步研究 | 第58-61页 |
| 5.2 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
