| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 1 引言 | 第14-38页 |
| 1.1 盐胁迫对植物的影响 | 第14-15页 |
| 1.2 植物应答盐胁迫的生理生化机制 | 第15-25页 |
| 1.2.1 重建体内离子平衡 | 第15-18页 |
| 1.2.1.1 SOS途径介导Na~+的外排 | 第15-16页 |
| 1.2.1.2 NHX对Na~+在液泡中的隔离 | 第16-17页 |
| 1.2.1.3 HKT抑制Na~+从地下到地上运输 | 第17-18页 |
| 1.2.2 合成与积累渗透保护物质 | 第18-19页 |
| 1.2.2.1 渗透保护物质脯氨酸 | 第18-19页 |
| 1.2.2.2 渗透保护物质甜菜碱 | 第19页 |
| 1.2.2.3 其它渗透保护物质 | 第19页 |
| 1.2.3 激活抗氧化酶活性及合成抗氧化化合物 | 第19-20页 |
| 1.2.4 增加体内多胺类物质 | 第20-21页 |
| 1.2.5 盐胁迫下NO调节 | 第21-22页 |
| 1.2.6 盐胁迫下激素调节 | 第22-23页 |
| 1.2.7 盐胁迫下基因表达调控 | 第23-25页 |
| 1.3 内质网及内质网胁迫响应 | 第25-34页 |
| 1.3.1 内质网简介 | 第25-27页 |
| 1.3.2 内质网胁迫 | 第27-28页 |
| 1.3.3 植物对内质网胁迫的响应 | 第28-34页 |
| 1.3.3.1 ERAD途径 | 第28-29页 |
| 1.3.3.2 UPR途径 | 第29-32页 |
| 1.3.3.3 自噬途径 | 第32-33页 |
| 1.3.3.4 PCD途径 | 第33-34页 |
| 1.4 盐胁迫与内质网胁迫 | 第34-36页 |
| 1.4.1 盐胁迫破坏内质网离子平衡 | 第34页 |
| 1.4.2 盐胁迫影响AtbZIPl7/AtbZIP60功能 | 第34-35页 |
| 1.4.3 盐胁迫影响ERAD途径 | 第35-36页 |
| 1.5 本课题的目的和意义 | 第36页 |
| 1.6 研究思路和技术路线 | 第36-38页 |
| 2 材料与方法 | 第38-64页 |
| 2.1 材料 | 第38-42页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第38页 |
| 2.1.2 植物材料培养与处理 | 第38页 |
| 2.1.3 载体与菌株 | 第38-39页 |
| 2.1.4 酶与各种生化试剂 | 第39页 |
| 2.1.5 实验引物及探针 | 第39-41页 |
| 2.1.6 网络信息资源 | 第41-42页 |
| 2.2 方法 | 第42-64页 |
| 2.2.1 CTAB法提取拟南芥基因组DNA | 第42页 |
| 2.2.2 RNA的提取 | 第42-44页 |
| 2.2.2.1 TRIZOL法提取拟南芥总RNA | 第42-43页 |
| 2.2.2.2 RNA中DNA的去除 | 第43页 |
| 2.2.2.3 RNA反转录成cDNA | 第43-44页 |
| 2.2.3 目的基因DNA片段的扩增与载体的构建 | 第44-46页 |
| 2.2.3.1 目的基因DNA片段的扩增 | 第44页 |
| 2.2.3.2 DNA片段的胶回收 | 第44-45页 |
| 2.2.3.3 平末端片段加A | 第45页 |
| 2.2.3.4 目的片段连载体 | 第45页 |
| 2.2.3.5 酶切与回收 | 第45-46页 |
| 2.2.4 大肠杆菌TOP10感受态的制备及转化 | 第46-47页 |
| 2.2.4.1 大肠杆菌TOP10感受态的制备 | 第46-47页 |
| 2.2.4.2 大肠杆菌转化 | 第47页 |
| 2.2.5 小量碱法提取大肠杆菌的质粒 | 第47页 |
| 2.2.6 农杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第47-48页 |
| 2.2.6.1 农杆菌GV3101感受态细胞的制备 | 第47-48页 |
| 2.2.6.2 农杆菌GV3101的转化 | 第48页 |
| 2.2.7 农杆菌转化拟南芥及转基因阳性苗的鉴定 | 第48-49页 |
| 2.2.7.1 农杆菌介导的花序浸染法 | 第48-49页 |
| 2.2.7.2 转基因阳性苗的筛选及鉴定 | 第49页 |
| 2.2.8 转基因拟南芥的GUS表达分析 | 第49-50页 |
| 2.2.8.1 转基因拟南芥的GUS组织化学染色 | 第49-50页 |
| 2.2.8.2 GUS活性测定 | 第50页 |
| 2.2.9 突变体纯合植株的鉴定 | 第50-51页 |
| 2.2.10 转录水平表达量的检测 | 第51-52页 |
| 2.2.10.1 实时定量PCR | 第51-52页 |
| 2.2.10.2 半定量RT-PCR | 第52页 |
| 2.2.11 Na~+/K~+含量的测定 | 第52-53页 |
| 2.2.12 农杆菌介导的本生烟瞬时转化 | 第53页 |
| 2.2.13 激光共聚焦显微镜观察GFP亚细胞定位 | 第53-54页 |
| 2.2.14 EMSA实验 | 第54-59页 |
| 2.2.14.1 原核诱导表达蛋白 | 第54页 |
| 2.2.14.2 试剂配制 | 第54-56页 |
| 2.2.14.3 蛋白质SDS-PAGE凝胶电泳 | 第56-57页 |
| 2.2.14.4 GST标签蛋白纯化 | 第57-58页 |
| 2.2.14.5 EMSA凝胶阻滞迁移电泳 | 第58-59页 |
| 2.2.15 染色质免疫共沉淀 | 第59-64页 |
| 2.2.15.1 试剂配置 | 第59-61页 |
| 2.2.15.2 染色质交联 | 第61-62页 |
| 2.2.15.3 染色质准备 | 第62页 |
| 2.2.15.4 抗原抗体免疫反应 | 第62页 |
| 2.2.15.5 洗脱和逆交联 | 第62-63页 |
| 2.2.15.6 DNA的回收与纯化 | 第63-64页 |
| 3 结果与分析 | 第64-90页 |
| 3.1 盐敏感突变体ses1的筛选鉴定 | 第64-65页 |
| 3.2 ses1突变基因的确定 | 第65-67页 |
| 3.2.1 ses1突变基因的图位克隆 | 第65页 |
| 3.2.2 proSES1::SES1互补ses1盐敏感表型分析 | 第65-67页 |
| 3.2.3 ses1-1与ses1-2突变基因等位位点验证 | 第67页 |
| 3.3 SES1编码蛋白理化性质分析 | 第67-68页 |
| 3.4 SES1过量表达株系盐胁迫抗性分析 | 第68-70页 |
| 3.4.1 SES1过量表达株系的获得及表达量检测 | 第68-69页 |
| 3.4.2 SES1过量表达株系的盐胁迫表型分析 | 第69-70页 |
| 3.5 ses1在离子毒害和渗透胁迫下的表型分析 | 第70-71页 |
| 3.6 SES1表达模式分析 | 第71-73页 |
| 3.6.1 SES1组织表达模式分析 | 第71-72页 |
| 3.6.2 SES1诱导表达模式分析 | 第72-73页 |
| 3.7 SES1亚细胞定位分析 | 第73-75页 |
| 3.8 ses1盐敏感与体内Na+含量分析 | 第75-76页 |
| 3.9 转录组分析盐胁迫处理前后ses1体内基因表达变化 | 第76-78页 |
| 3.10 蛋白组分析盐胁迫处理前后ses1体内蛋白水平的变化 | 第78-81页 |
| 3.11 盐胁迫处理前后ses1内质网的形态分析 | 第81-83页 |
| 3.12 SES1对内质网中蛋白质折叠的影响 | 第83-85页 |
| 3.13 SES1参与植物内质网胁迫响应分析 | 第85-86页 |
| 3.14 转录因子bZIP17靶向SES1启动子ERSEL元件调控SES1表达分析 | 第86-90页 |
| 4 讨论 | 第90-95页 |
| 5 结论 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
| 攻读学位期间发表的论文及成果 | 第120页 |
