| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一章 绪论 | 第15-26页 |
| 1.1 珠子参研究进展 | 第15-16页 |
| 1.2 珠子参化学成分分析 | 第16-19页 |
| 1.2.1 皂苷成分 | 第16-18页 |
| 1.2.2 甾醇成分 | 第18-19页 |
| 1.2.3 其他成分 | 第19页 |
| 1.3 珠子参的药理学作用 | 第19-20页 |
| 1.3.1 心脑血管的保护作用 | 第19页 |
| 1.3.2 在肿瘤防治中的作用 | 第19页 |
| 1.3.3 对免疫系统的影响 | 第19-20页 |
| 1.3.4 抗炎镇痛作用 | 第20页 |
| 1.3.5 其他作用 | 第20页 |
| 1.4 三萜类皂苷的生物合成 | 第20-24页 |
| 1.4.1 珠子参皂苷的生物合成 | 第20-22页 |
| 1.4.2 三萜皂苷合成途径中关键酶的研究进展 | 第22-24页 |
| 1.5 本课题的研究目的和意义 | 第24-25页 |
| 1.6 技术路线 | 第25-26页 |
| 第二章 珠子参关键酶基因PjFPS的克隆与分析 | 第26-49页 |
| 2.1 前言 | 第26页 |
| 2.2 实验材料 | 第26-29页 |
| 2.2.1 植物材料 | 第26页 |
| 2.2.2 菌株与载体 | 第26-27页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第27-28页 |
| 2.2.4 主要溶液及培养基 | 第28-29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29-37页 |
| 2.3.1 珠子参总RNA的提取 | 第29-30页 |
| 2.3.2 珠子参PjFPS关键酶基因的克隆 | 第30-31页 |
| 2.3.3 T-A克隆 | 第31-32页 |
| 2.3.4 转化大肠杆菌感受态细胞 | 第32页 |
| 2.3.5 质粒DNA的提取 | 第32-33页 |
| 2.3.6 双酶切 | 第33页 |
| 2.3.7 双酶切产物胶回收 | 第33页 |
| 2.3.8 T4 DNA连接 | 第33-34页 |
| 2.3.9 转化大肠杆菌感受态细胞 | 第34页 |
| 2.3.10 PjFPS亚细胞定位 | 第34-36页 |
| 2.3.11 PjFPS基因生物信息学分析 | 第36页 |
| 2.3.12 pCAMBIA1300s-PjFPS重组载体的检测 | 第36-37页 |
| 2.4 结果与分析 | 第37-46页 |
| 2.4.1 珠子参细胞总RNA的提取 | 第37页 |
| 2.4.2 PjFPS基因开放阅读框全长序列的克隆 | 第37-38页 |
| 2.4.3 PjFPS基因编码蛋白的二级结构分析及三级结构预测 | 第38-39页 |
| 2.4.4 PjFPS编码蛋白理化性质的分析 | 第39页 |
| 2.4.5 PjFPS编码蛋白信号肽和亚细胞定位预测 | 第39-40页 |
| 2.4.6 PjFPS多重序列比对以及系统进化树分析 | 第40-43页 |
| 2.4.7 pCAMBIA1300s-PjFPS载体的构建 | 第43-45页 |
| 2.4.8 PjFPS的亚细胞定位 | 第45-46页 |
| 2.5 讨论 | 第46-49页 |
| 第三章 根癌农杆菌介导的PjFPS基因的遗传转化 | 第49-64页 |
| 3.1 前言 | 第49-50页 |
| 3.2 实验材料 | 第50-51页 |
| 3.2.1 材料、菌株、载体和试剂 | 第50页 |
| 3.2.2 主要溶液和培养基的配制 | 第50-51页 |
| 3.3 实验方法 | 第51-56页 |
| 3.3.1 提取目的质粒 | 第51页 |
| 3.3.2 根癌农杆菌的感受态细胞系的制备及转化 | 第51-53页 |
| 3.3.3 根癌农杆菌遗传转化珠子参细胞 | 第53页 |
| 3.3.4 转FPS-β-AS基因珠子参细胞分子水平的检测 | 第53-56页 |
| 3.3.5 转FPS-β-AS基因珠子参细胞分子水平的酶活测定 | 第56页 |
| 3.4 结果与分析 | 第56-63页 |
| 3.4.1 pCAMBIA1300s-PjFPS载体构建与验证 | 第56-57页 |
| 3.4.2 转FPS-β-AS基因珠子参细胞系基因组DNA的PCR检测 | 第57-58页 |
| 3.4.3 转PjFPS基因珠子参细胞系基因组水平检测 | 第58-60页 |
| 3.4.4 转FPS-β-AS基因珠子参细胞系基因组水平检测 | 第60页 |
| 3.4.5 转PjFPS基因珠子参细胞酶活分析 | 第60-62页 |
| 3.4.6 转FPS-β-AS基因珠子参细胞酶活分析 | 第62-63页 |
| 3.5 讨论 | 第63-64页 |
| 第四章 转FPS/β-AS基因珠子参细胞系次生代谢产物分析 | 第64-74页 |
| 4.1 前言 | 第64-65页 |
| 4.2 植物材料 | 第65页 |
| 4.3 实验方法 | 第65-68页 |
| 4.3.1 珠子参总皂苷含量的测定 | 第65-67页 |
| 4.3.2 珠子参植物甾醇的测定 | 第67-68页 |
| 4.4 结果与分析 | 第68-71页 |
| 4.4.1 转PjFPS基因珠子参细胞总皂苷含量的分析 | 第68-69页 |
| 4.4.2 转FPS-β-AS基因珠子参细胞总皂苷含量的分析 | 第69-70页 |
| 4.4.3 转PjFPS基因珠子参细胞植物甾醇含量的分析 | 第70-71页 |
| 4.4.4 转FPS-β-AS基因珠子参细胞植物甾醇含量的分析 | 第71页 |
| 4.5 讨论 | 第71-72页 |
| 4.6 小结 | 第72-74页 |
| 第五章 总结与展望 | 第74-78页 |
| 5.1 总结 | 第74-75页 |
| 5.2 展望 | 第75-78页 |
| 致谢 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-90页 |
| 附录 A 攻读硕士期间发表论文目录 | 第90页 |
