| 内容摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略表 | 第13-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-33页 |
| 1.1 解淀粉芽孢杆菌研究进展 | 第15-20页 |
| 1.1.1 解淀粉芽孢杆菌简况 | 第15-16页 |
| 1.1.2 解淀粉芽孢杆菌的研究现状 | 第16-19页 |
| 1.1.3 解淀粉芽孢杆菌的应用 | 第19-20页 |
| 1.2 解淀粉芽孢杆菌遗传操作体系 | 第20-26页 |
| 1.2.1 遗传转化体系 | 第21-22页 |
| 1.2.2 载体系统 | 第22-26页 |
| 1.3 芽孢杆菌高效分泌表达元件 | 第26-30页 |
| 1.3.1 表达元件-启动子 | 第26-29页 |
| 1.3.2 分泌元件-信号肽 | 第29-30页 |
| 1.4 影响外源蛋白在芽孢杆菌中表达量的其他因素 | 第30-32页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第32-33页 |
| 第二章 解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens K11高效表达体系的建立 | 第33-62页 |
| 2.1 前言 | 第33页 |
| 2.2 实验材料 | 第33-36页 |
| 2.2.1 菌株与载体 | 第33页 |
| 2.2.2 引物合成、基因合成与DNA测序 | 第33页 |
| 2.2.3 试剂与仪器 | 第33-34页 |
| 2.2.4 培养基及溶液的配制 | 第34-36页 |
| 2.3 实验方法 | 第36-51页 |
| 2.3.1 芽孢杆菌基因组DNA的提取 | 第36-37页 |
| 2.3.2 枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第37-38页 |
| 2.3.3 解淀粉芽孢杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第38页 |
| 2.3.4 DNA片段的回收或纯化 | 第38-39页 |
| 2.3.5 阳性转化子的筛选 | 第39页 |
| 2.3.6 芽孢杆菌质粒DNA的提取和酶切验证 | 第39-40页 |
| 2.3.7 报告基因重组表达载体的构建 | 第40-42页 |
| 2.3.8 解淀粉芽孢杆菌中性蛋白酶缺陷型突变株7-6的构建 | 第42-45页 |
| 2.3.9 报告基因在解淀粉芽孢杆菌K11和7-6中的表达及摇瓶发酵试验 | 第45-46页 |
| 2.3.10 解淀粉芽孢杆菌重组菌的发酵罐小试试验 | 第46页 |
| 2.3.11 酶活测定方法 | 第46-50页 |
| 2.3.12 重组蛋白表达产物SDS-PAGE电泳分析 | 第50-51页 |
| 2.4 结果与分析 | 第51-58页 |
| 2.4.1 解淀粉芽孢杆菌高效分泌表达元件的筛选 | 第51-53页 |
| 2.4.2 高效分泌表达元件通用型验证 | 第53-54页 |
| 2.4.3 解淀粉芽孢杆菌中性蛋白酶缺陷型突变株的构建 | 第54-55页 |
| 2.4.4 报告基因在蛋白酶缺陷型突变株7-6中的表达 | 第55-57页 |
| 2.4.5 解淀粉芽孢杆菌重组菌QC-E在15-L发酵罐水平的验证 | 第57-58页 |
| 2.5 讨论 | 第58-61页 |
| 本章小结 | 第61-62页 |
| 第三章 解淀粉芽孢杆菌高效表达元件的优化 | 第62-75页 |
| 3.1 前言 | 第62页 |
| 3.2 实验材料 | 第62-64页 |
| 3.2.1 菌株与载体 | 第62页 |
| 3.2.2 引物的合成与DNA测序 | 第62页 |
| 3.2.3 试剂与仪器 | 第62页 |
| 3.2.4 培养基及溶液的配制 | 第62-64页 |
| 3.3 实验方法 | 第64-68页 |
| 3.3.1 分泌表达盒突变库的构建 | 第64-65页 |
| 3.3.2 碱性蛋白酶酶活测定方法 | 第65-66页 |
| 3.3.3 分泌表达盒突变文库的筛选 | 第66-68页 |
| 3.4 结果与分析 | 第68-72页 |
| 3.4.1 分泌表达盒突变文库的构建 | 第68页 |
| 3.4.2 分泌表达盒突变文库的筛选 | 第68-70页 |
| 3.4.3 分泌表达盒突变序列的分析 | 第70-72页 |
| 3.5 讨论 | 第72-74页 |
| 本章小结 | 第74-75页 |
| 第四章 全文结论 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-88页 |
| 致谢 | 第88-90页 |
| 作者简历 | 第90-91页 |
| 附录一 本研究所用引物 | 第91-93页 |
| 附录二 载体构建所需引物及模板 | 第93-94页 |
