| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7页 |
| 第一章 引言 | 第17-23页 |
| 1.1 弓形虫概述 | 第17-18页 |
| 1.1.1 弓形虫病原学 | 第17页 |
| 1.1.2 弓形虫生命周期 | 第17-18页 |
| 1.2 弓形虫排泄分泌抗原研究进展 | 第18-20页 |
| 1.3 弓形虫病的诊断 | 第20-21页 |
| 1.4 镧系微球试纸条层析技术 | 第21-22页 |
| 1.5 本研究的意义 | 第22-23页 |
| 第二章 弓形虫GRA1、mic4基因的克隆与原核表达 | 第23-37页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第23-24页 |
| 2.1.1 虫体、菌株与载体 | 第23页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第24页 |
| 2.2 方法 | 第24-28页 |
| 2.2.1 引物的设计与合成 | 第24页 |
| 2.2.2 弓形虫速殖子的收集和RNA提取 | 第24-25页 |
| 2.2.3 基因的RT-PCR扩增 | 第25-26页 |
| 2.2.4 重组表达质粒的构建和鉴定 | 第26-27页 |
| 2.2.5 重组质粒诱导表达 | 第27页 |
| 2.2.6 重组蛋白的纯化 | 第27-28页 |
| 2.2.7 重组蛋白Western-blot分析 | 第28页 |
| 2.3 结果与分析 | 第28-36页 |
| 2.3.1 目的基因的扩增 | 第28页 |
| 2.3.2 重组表达质粒的鉴定 | 第28-29页 |
| 2.3.3 原核表达产物的SDS-PAGE及可溶性分析 | 第29-31页 |
| 2.3.4 重组质粒原核表达条件的优化 | 第31-34页 |
| 2.3.5 重组蛋白的纯化 | 第34-35页 |
| 2.3.6 重组蛋白的Western-blot分析 | 第35-36页 |
| 2.4 讨论 | 第36-37页 |
| 第三章 GRA1单克隆抗体的制备及鉴定 | 第37-49页 |
| 3.1 材料 | 第37-39页 |
| 3.1.1 实验动物及细胞株 | 第37页 |
| 3.1.2 主要试剂与耗材 | 第37-38页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第38页 |
| 3.1.4 相关溶液 | 第38-39页 |
| 3.2 方法 | 第39-43页 |
| 3.2.1 重组抗原的准备 | 第39页 |
| 3.2.2 免疫BALB/c小鼠 | 第39-40页 |
| 3.2.3 单克隆抗体的制备 | 第40-42页 |
| 3.2.4 单抗效价的测定 | 第42-43页 |
| 3.2.5 间接免疫荧光实验 | 第43页 |
| 3.2.6 Western-blot分析 | 第43页 |
| 3.3 结果与分析 | 第43-47页 |
| 3.3.1 BALB/c小鼠的免疫 | 第43-44页 |
| 3.3.2 细胞融合后观察 | 第44页 |
| 3.3.3 筛选阳性克隆 | 第44-45页 |
| 3.3.4 单抗效价测定 | 第45-46页 |
| 3.3.5 间接免疫荧光试验分析 | 第46页 |
| 3.3.6 Western-blot分析结果 | 第46-47页 |
| 3.4 讨论 | 第47-49页 |
| 第四章 镧系微球免疫层析试纸条检测血清抗体方法的建立 | 第49-65页 |
| 4.1 材料与仪器 | 第49-51页 |
| 4.1.1 试剂 | 第49页 |
| 4.1.2 实验材料 | 第49-50页 |
| 4.1.3 仪器 | 第50页 |
| 4.1.4 主要相关试剂溶液配制 | 第50-51页 |
| 4.2 方法 | 第51-55页 |
| 4.2.1 抗原的准备和鉴定 | 第51页 |
| 4.2.2 荧光微球标记SPA | 第51页 |
| 4.2.3 免疫层析试纸条的组装 | 第51-52页 |
| 4.2.4 镧系微球试纸条层析、反应和结果判定 | 第52-54页 |
| 4.2.5 试纸条优化 | 第54-55页 |
| 4.2.6 荧光微球试纸条评价 | 第55页 |
| 4.2.7 犬血清样本的检测 | 第55页 |
| 4.3 结果与分析 | 第55-63页 |
| 4.3.1 抗原的准备和鉴定 | 第55-57页 |
| 4.3.2 试纸条优化 | 第57-60页 |
| 4.3.3 试纸条的评价 | 第60-62页 |
| 4.3.4 犬血清样本检测结果 | 第62-63页 |
| 4.4 讨论 | 第63-65页 |
| 第五章 全文总结 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 作者简历 | 第75页 |
