| 摘要 | 第5-6页 |
| abstract | 第6页 |
| 第一章 绪论 | 第9-25页 |
| 1.1 微生物天然产物 | 第9-11页 |
| 1.1.1 微生物天然产物的重要性 | 第9-10页 |
| 1.1.2 微生物天然产物研究策略 | 第10-11页 |
| 1.2 合成生物学概述 | 第11-19页 |
| 1.2.1 合成生物学基本概念 | 第11-12页 |
| 1.2.2 合成生物学基本元件 | 第12-13页 |
| 1.2.3 合成生物学在天然产物领域的应用 | 第13-15页 |
| 1.2.4 合成生物学基本元件在链霉菌中的研究进展 | 第15-19页 |
| 1.3 沉默基因簇及激活沉默基因簇方法的概述 | 第19-22页 |
| 1.4 本研究的主要目的和意义 | 第22-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-47页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-37页 |
| 2.1.1 培养基及缓冲液 | 第25-28页 |
| 2.1.2 质粒、菌株及引物 | 第28-36页 |
| 2.1.3 试剂和试剂盒 | 第36-37页 |
| 2.1.4 仪器 | 第37页 |
| 2.2 实验方法 | 第37-47页 |
| 2.2.1 质粒DNA提取 | 第37-38页 |
| 2.2.2 PCR | 第38-39页 |
| 2.2.3 大肠杆菌感受态细胞的制备及质粒转化 | 第39页 |
| 2.2.4 多个小片段连接实验方法 | 第39-41页 |
| 2.2.5 DNA的乙醇沉淀 | 第41页 |
| 2.2.6 Gibson反应 | 第41页 |
| 2.2.7 链霉菌中总RNA提取、浓度测定、基因组去除处理及反转录 | 第41-43页 |
| 2.2.8 Realtime PCR | 第43页 |
| 2.2.9 大肠杆菌-链霉菌接合转移 | 第43-44页 |
| 2.2.10 阿维菌素的摇瓶发酵工艺 | 第44页 |
| 2.2.11 链霉菌基因组提取及微波炉法快速提取孢子基因组 | 第44-45页 |
| 2.2.12 xylE活性的定性检测 | 第45-47页 |
| 第三章 终止子元件在链霉菌中的筛选和评价 | 第47-65页 |
| 3.1 前言 | 第47-48页 |
| 3.2 终止子探索实验结果与分析 | 第48-57页 |
| 3.2.1 选用双报告系统的设计思路 | 第48页 |
| 3.2.2 双报告系统中22个不同终止子载体构建 | 第48-51页 |
| 3.2.3 不同终止子转入委内瑞拉链霉菌,接合转移后的链霉菌在kana平板上半定量筛选 | 第51-57页 |
| 3.3 用不同的链霉菌宿主和不同的基因验证终止子的作用 | 第57-60页 |
| 3.3.1 用不同的链霉菌宿主验证终止子效率 | 第57-58页 |
| 3.3.2 用链霉菌自身的番茄红素基因验证筛选到的终止子的作用 | 第58-60页 |
| 3.4 终止子在阿维链霉菌中的应用 | 第60-62页 |
| 3.4.1 分析aveR和aveF的链特异性转录组信息 | 第60-61页 |
| 3.4.2 在aveR和aveF之间插入终止子载体构建 | 第61-62页 |
| 3.4.3 在阿维链霉菌aveR和aveF之间插入终止子实验结果 | 第62页 |
| 3.5 小结与讨论 | 第62-65页 |
| 第四章 结论与展望 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-71页 |
| 缩略词 | 第71-73页 |
| 致谢 | 第73-75页 |
| 附录 | 第75-91页 |
