| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 1 前言 | 第15-32页 |
| 1.1 植物线粒体基因组与CMS的关系 | 第16-21页 |
| 1.1.1 植物线粒体基因组结构与功能 | 第16-17页 |
| 1.1.2 线粒体嵌合基因与CMS的关系 | 第17-19页 |
| 1.1.3 线粒体基因缺失、插入突变与CMS的关系 | 第19-20页 |
| 1.1.4 线粒体类质粒DNA与CMS的关系 | 第20页 |
| 1.1.5 线粒体RNA编辑与CMS的关系 | 第20-21页 |
| 1.2 植物叶绿体基因组与CMS关系 | 第21-23页 |
| 1.2.1 叶绿体结构与功能 | 第21-22页 |
| 1.2.2 叶绿体基因组与CMS关系 | 第22-23页 |
| 1.3 质核互作与CMS关系 | 第23-26页 |
| 1.3.1 核基因组与细胞质基因组存在基因交流 | 第23-24页 |
| 1.3.2 核恢复基因调控线粒体CMS基因 | 第24-26页 |
| 1.4 分子标记技术在植物CMS研究中的运用 | 第26-28页 |
| 1.4.1 分子标记技术运用于植物CMS系不育基因标记 | 第26-27页 |
| 1.4.2 分子标记技术运用于核恢复基因标记 | 第27-28页 |
| 1.5 红麻雄性不育机理研究进展 | 第28-30页 |
| 1.6 研究的目的意义、背景及研究内容 | 第30-32页 |
| 2 实验材料与方法 | 第32-59页 |
| 2.1 atp6、atp9、atpA基因克隆实验材料与方法 | 第32-42页 |
| 2.1.1 材料 | 第32-33页 |
| 2.1.1.1 植物材料 | 第32页 |
| 2.1.1.2 atp6、atp9、atpA基因克隆引物 | 第32-33页 |
| 2.1.2 实验方法 | 第33-42页 |
| 2.1.2.1 红麻线粒体DNA的提取与纯化 | 第33-36页 |
| 2.1.2.2 同源克隆保守片段反应体系与程序 | 第36页 |
| 2.1.2.3 采用hiTAIL-PCR方法克隆atp6、atp9、atpA两侧翼序列 | 第36-38页 |
| 2.1.2.4 目的片段回收 | 第38-39页 |
| 2.1.2.5 大肠杆菌DH5a感受态细胞的制备（朱旭芬，2010) | 第39页 |
| 2.1.2.6 目的片段的连接 | 第39-40页 |
| 2.1.2.7 大肠杆菌的转化（朱旭芬，2010) | 第40-41页 |
| 2.1.2.8 质粒提取方法（少量制备法，朱旭芬，2010) | 第41-42页 |
| 2.2 atp6、atp9、atpA差异表达材料与方法 | 第42-47页 |
| 2.2.1 材料 | 第42-43页 |
| 2.2.1.1 植物材料 | 第42页 |
| 2.2.1.2 荧光定量引物 | 第42-43页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第43-47页 |
| 2.2.2.1 红麻双核期花药RNA提取方法 | 第43-44页 |
| 2.2.2.2 制备荧光定量双标准曲线cDNA模板 | 第44-45页 |
| 2.2.2.3 实时荧光定量----相对定量 | 第45-47页 |
| 2.3 RNA编辑实验材料与方法 | 第47-48页 |
| 2.3.1 实验材料 | 第47页 |
| 2.3.1.1 植物材料 | 第47页 |
| 2.3.1.2 RNA编辑引物 | 第47页 |
| 2.3.2 实验方法 | 第47-48页 |
| 2.4 农杆菌介导法遗传转化烟草的实验材料与方法 | 第48-55页 |
| 2.4.1 实验材料与试剂 | 第48-49页 |
| 2.4.2 表达载体构建 | 第49-51页 |
| 2.4.3 实验方法 | 第51-55页 |
| 2.4.3.1 非转基因烟草组培苗扩繁培养基 | 第51页 |
| 2.4.3.2 转基因烟草组培苗培养基 | 第51-52页 |
| 2.4.3.3 红麻重组表达载体转化根癌农杆菌 | 第52-53页 |
| 2.4.3.4 农杆菌介导的遗传转化 | 第53-54页 |
| 2.4.3.5 转基因植株的分子检测 | 第54-55页 |
| 2.5 分子标记的实验材料与方法 | 第55-58页 |
| 2.5.1 实验材料 | 第55-57页 |
| 2.5.1.1 植物材料 | 第55-56页 |
| 2.5.1.2 引物 | 第56-57页 |
| 2.5.2 红麻基因组DNA提取 | 第57-58页 |
| 2.5.3 红麻细胞质分子标签检测红麻种质资源方法与程序 | 第58页 |
| 2.6 主要实验仪器 | 第58-59页 |
| 3 结果与分析 | 第59-111页 |
| 3.1 基因克隆及功能分析 | 第59-105页 |
| 3.1.1 线粒体基因全长克隆 | 第59-78页 |
| 3.1.1.1 线粒体DNA提取 | 第59-60页 |
| 3.1.1.2 atp9基因全长克隆与分析 | 第60-65页 |
| 3.1.1.3 atp6基因全长克隆与分析 | 第65-72页 |
| 3.1.1.4 atpA基因全长克隆与分析 | 第72-78页 |
| 3.1.2 线粒体基因差异表达 | 第78-85页 |
| 3.1.2.1 RNA检测 | 第78-79页 |
| 3.1.2.2 管家基因的选择与管家基因GAPDH片段克隆 | 第79-80页 |
| 3.1.2.3 atp9基因差异表达 | 第80-81页 |
| 3.1.2.4 atp6基因差异表达 | 第81-83页 |
| 3.1.2.5 atpA基因差异表达 | 第83-85页 |
| 3.1.3 线粒体基因RNA编辑 | 第85-93页 |
| 3.1.3.1 RNA及反转录cDNA检测 | 第85-86页 |
| 3.1.3.2 atp9基因RNA编辑 | 第86-89页 |
| 3.1.3.3 atp6基因RNA编辑 | 第89-91页 |
| 3.1.3.4 atpA基因RNA编辑 | 第91-93页 |
| 3.1.4 线粒体基因农杆菌介导法功能验证 | 第93-105页 |
| 3.1.4.1 表达载体的构建与检测 | 第93-95页 |
| 3.1.4.2 农杆菌转化子检测 | 第95-97页 |
| 3.1.4.3 农杆菌介导法转化烟草 | 第97-105页 |
| 3.2 红麻雄性不育细胞质分子标记 | 第105-111页 |
| 3.2.1 atp9分子标签 | 第105-108页 |
| 3.2.2 atp6分子标签 | 第108-111页 |
| 4 讨论 | 第111-115页 |
| 4.1 线粒体能量代谢基因atp9与红麻CMS的关系 | 第111-112页 |
| 4.2 线粒体能量代谢基因atp6与红麻CMS的关系 | 第112页 |
| 4.3 线粒体能量代谢基因atpA与红麻CMS的关系 | 第112-113页 |
| 4.4 线粒体基因atp9、atp6、atpA RNA编辑与红麻CMS的关系 | 第113-114页 |
| 4.5 转基因功能验证的问题探讨 | 第114页 |
| 4.6 红麻野败型细胞质分子标记在育种中的作用 | 第114-115页 |
| 5 全文总结 | 第115-117页 |
| 6 展望 | 第117-118页 |
| 致谢 | 第118-119页 |
| 参考文献 | 第119-131页 |
| 攻读博士学位期间科研、论文发表情况 | 第131-133页 |
| 附图 | 第133页 |
