| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-20页 |
| 1.1 淹涝对植物的危害 | 第11-14页 |
| 1.1.1 淹涝胁迫对植物根系活力产生的影响 | 第11页 |
| 1.1.2 淹涝胁迫对植物光合作用的影响 | 第11-12页 |
| 1.1.3 淹涝胁迫对植物呼吸作用的影响 | 第12-13页 |
| 1.1.4 淹涝胁迫对植物激素的影响 | 第13-14页 |
| 1.2 植物耐涝性的遗传改良 | 第14页 |
| 1.3 植物耐涝性相关基因的研究进展 | 第14-19页 |
| 1.3.1 转录因子AP2/ERF研究进展 | 第14-17页 |
| 1.3.1.1 AP2/ERF转录因子家族的命名、结构和分类 | 第14-15页 |
| 1.3.1.2 AP2/ERF类转录因子的生物学功能 | 第15-17页 |
| 1.3.2 蛋白激酶CIPK基因研究进展 | 第17-19页 |
| 1.3.2.1 CIPK基因简介 | 第17-18页 |
| 1.3.2.2 蛋白激酶CIPK结构 | 第18-19页 |
| 1.3.2.3 CIPK基因在淹水逆境胁迫中的调控 | 第19页 |
| 1.4 本研究的目的及意义 | 第19-20页 |
| 第二章 樱桃耐涝相关基因过表达和RNAi载体的构建 | 第20-44页 |
| 2.1 材料与方法 | 第20-29页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第20-21页 |
| 2.1.1.1 植物材料 | 第20页 |
| 2.1.1.2 载体质粒与菌株 | 第20页 |
| 2.1.1.3 主要试剂与仪器 | 第20页 |
| 2.1.1.4 主要试剂的配制 | 第20-21页 |
| 2.1.2 试验方法 | 第21-29页 |
| 2.1.2.1 反转录cDNA第一链合成 | 第21页 |
| 2.1.2.2 目的基因的初步获取 | 第21-23页 |
| 2.1.2.3 目的基因(含有酶切位点)的获取 | 第23-24页 |
| 2.1.2.4 双元表达载体pCAMBIA1304和RNAi载体pFGC5941酶切及产物回收 | 第24-26页 |
| 2.1.2.5 目的片段与表达载体的连接 | 第26页 |
| 2.1.2.6 连接产物转化大肠杆菌 | 第26页 |
| 2.1.2.7 重组质粒菌液PCR验证 | 第26-27页 |
| 2.1.2.8 重组质粒酶切鉴定及检测 | 第27页 |
| 2.1.2.9 采用冻融法将重组质粒导入农杆菌EHA105及筛选鉴定 | 第27-29页 |
| 2.2 结果与分析 | 第29-43页 |
| 2.2.1 樱桃PsERF和PsCIPK基因的初步获取与序列分析 | 第29-32页 |
| 2.2.1.1 cDNA全长序列的克隆 | 第29页 |
| 2.2.1.2 基因序列分析 | 第29-32页 |
| 2.2.2 重组质粒的酶切验证及测序分析 | 第32-40页 |
| 2.2.2.1 过表达载体重组质粒的酶切验证及测序分析 | 第32-36页 |
| 2.2.2.2 沉默表达载体重组质粒的酶切验证及测序分析 | 第36-40页 |
| 2.2.3 重组质粒转化农杆菌 | 第40-43页 |
| 2.3 讨论 | 第43-44页 |
| 第三章 樱桃PsERF和PsCIPK基因功能验证研究 | 第44-64页 |
| 3.1 材料与方法 | 第44-52页 |
| 3.1.1 材料 | 第44-45页 |
| 3.1.1.1 植物材料 | 第44页 |
| 3.1.1.2 主要试剂 | 第44-45页 |
| 3.1.1.3 主要仪器 | 第45页 |
| 3.1.1.4 主要培养基的配制 | 第45页 |
| 3.1.2 试验方法 | 第45-52页 |
| 3.1.2.1 拟南芥的培养 | 第45-46页 |
| 3.1.2.2 Floral-dip法侵染拟南芥花序 | 第46页 |
| 3.1.2.3 转基因拟南芥筛选及鉴定 | 第46-48页 |
| 3.1.2.4 PsERF和PsCIPK基因在拟南芥中的表达分析 | 第48-51页 |
| 3.1.2.5 拟南芥淹涝处理 | 第51-52页 |
| 3.1.2.6 拟南芥碳水化合物代谢相关酶活性的测定 | 第52页 |
| 3.2 结果与分析 | 第52-61页 |
| 3.2.1 Floral-dip法获得转基因拟南芥 | 第52-55页 |
| 3.2.1.1 转基因植株抗性筛选 | 第52-53页 |
| 3.2.1.2 纯合转基因株系的获得 | 第53-54页 |
| 3.2.1.3 纯合转基因株系的分子鉴定 | 第54-55页 |
| 3.2.2 纯合转基因株系的目的基因荧光定量PCR分析 | 第55-56页 |
| 3.2.3 纯合转基因株系表型分析 | 第56-57页 |
| 3.2.3.1 转基因拟南芥根系表型分析 | 第56页 |
| 3.2.3.2 转基因拟南芥淹涝处理表型分析 | 第56-57页 |
| 3.2.4 淹涝胁迫下拟南芥碳水化合物代谢相关酶活性分析 | 第57-61页 |
| 3.2.4.1 蔗糖合成酶(SUS)活性分析 | 第57-58页 |
| 3.2.4.2 转基因拟南芥中α-淀粉酶(RAMY)活性的分析 | 第58-59页 |
| 3.2.4.3 转基因拟南芥中乙醇脱氢酶(ADH)活性的分析 | 第59-60页 |
| 3.2.4.4 转基因拟南芥中丙酮酸脱羧酶(PDC)活性的分析 | 第60页 |
| 3.2.4.5 转基因拟南芥中可溶性蛋白活性的分析 | 第60-61页 |
| 3.3 讨论 | 第61-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
