| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 符号说明 | 第11-13页 |
| 第一章 传染性法氏囊病毒的研究进展 | 第13-21页 |
| 1 IBD的病原学特征 | 第13-14页 |
| 2 IBDV的进化 | 第14-15页 |
| 2.1 选择压力 | 第14页 |
| 2.2 同源重组 | 第14-15页 |
| 3 IBDV的基因组结构及蛋白组的研究 | 第15-18页 |
| 3.1 IBDV的基因组结构 | 第15页 |
| 3.2 IBDV蛋白组的研究 | 第15-18页 |
| 3.2.1 VP1蛋白 | 第15-16页 |
| 3.2.2 VP2蛋白 | 第16-17页 |
| 3.2.3 VP3蛋白 | 第17页 |
| 3.2.4 VP4蛋白 | 第17页 |
| 3.2.5 VP5蛋白 | 第17-18页 |
| 4 传染性法氏囊病检测技术 | 第18-19页 |
| 4.1 血清学和免疫学技术 | 第18-19页 |
| 4.2 分子生物学技术 | 第19页 |
| 5 单克隆抗体技术在IBDV研究上的应用 | 第19-21页 |
| 5.1 IBDV的检测 | 第19页 |
| 5.2 IBDV抗原表位的鉴定 | 第19页 |
| 5.3 IBDV的防治 | 第19-21页 |
| 第二章 鸡传染性法氏囊病毒VP2蛋白单克隆抗体的制备及其应用 | 第21-47页 |
| 1 材料 | 第21-24页 |
| 1.1 载体与菌株 | 第21页 |
| 1.2 病毒、细胞及实验动物 | 第21页 |
| 1.3 主要生物试剂 | 第21-22页 |
| 1.4 主要试剂的配制 | 第22-24页 |
| 1.4.1 SDS-PAGE主要试剂配制 | 第22-23页 |
| 1.4.2 Western blot主要试剂配制 | 第23页 |
| 1.4.3 ELISA主要试剂配制 | 第23页 |
| 1.4.4 蛋白纯化试剂配制 | 第23页 |
| 1.4.5 其它试剂的配制 | 第23-24页 |
| 1.5 主要实验仪器 | 第24页 |
| 2 方法 | 第24-36页 |
| 2.1 VP2蛋白的原核表达 | 第24-30页 |
| 2.1.1 IBDV的增殖 | 第24页 |
| 2.1.2 IBDV基因组RNA的提取 | 第24-25页 |
| 2.1.3 SNJ93 VP2基因序列分析 | 第25-26页 |
| 2.1.4 引物设计及合成 | 第26页 |
| 2.1.5 IBDV VP2基因的扩增 | 第26-27页 |
| 2.1.6 表达载体pET-32a-VP2质粒和pGEX-6p-1-VP2质粒的构建 | 第27-28页 |
| 2.1.7 重组质粒的转化 | 第28页 |
| 2.1.8 重组质粒的鉴定及阳性质粒的提取 | 第28-29页 |
| 2.1.9 重组蛋白的诱导表达 | 第29页 |
| 2.1.10 Western blot鉴定重组蛋白 | 第29-30页 |
| 2.2 VP2蛋白单克隆抗体的制备 | 第30-34页 |
| 2.2.1 免疫原及检测原的制备 | 第30页 |
| 2.2.2 动物免疫 | 第30页 |
| 2.2.3 阳性杂交瘤细胞筛选方法的建立及小鼠血清抗体效价的测定 | 第30-31页 |
| 2.2.4 细胞准备 | 第31页 |
| 2.2.5 细胞融合 | 第31-32页 |
| 2.2.6 阳性细胞株的筛选 | 第32页 |
| 2.2.7 阳性细胞株的亚克隆 | 第32-33页 |
| 2.2.8 单克隆抗体的鉴定 | 第33页 |
| 2.2.9 腹水的制备及纯化 | 第33-34页 |
| 2.3 VP2蛋白单克隆抗体的应用 | 第34-36页 |
| 2.3.1 间接免疫荧光(IFA)检测方法的初步建立 | 第34-35页 |
| 2.3.2 临床样品检测 | 第35-36页 |
| 3 结果 | 第36-45页 |
| 3.1 VP2蛋白的表达 | 第36-39页 |
| 3.1.1 SNJ93 VP2基因的分析 | 第36-37页 |
| 3.1.2 IBDV VP2基因片段的PCR扩增 | 第37页 |
| 3.1.3 重组质粒的构建 | 第37页 |
| 3.1.4 重组质粒的诱导表达 | 第37-38页 |
| 3.1.5 Western blot鉴定重组蛋白 | 第38-39页 |
| 3.2 VP2蛋白单克隆抗体的制备 | 第39-42页 |
| 3.2.1 重组蛋白的纯化 | 第39页 |
| 3.2.2 阳性杂交瘤细胞株筛选方法的建立 | 第39-40页 |
| 3.2.3 融合前小鼠血清效价的测定 | 第40页 |
| 3.2.4 阳性杂交瘤细胞株的筛选 | 第40页 |
| 3.2.5 杂交瘤细胞的亚克隆及冻存 | 第40-41页 |
| 3.2.6 单克隆抗体的鉴定 | 第41-42页 |
| 3.2.7 单克隆抗体稳定性的测定 | 第42页 |
| 3.3 VP2蛋白单克隆抗体的应用 | 第42-45页 |
| 3.3.1 间接免疫荧光试验检测方法的初步建立 | 第42-44页 |
| 3.3.2 临床样品检测 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-47页 |
| 全文总结 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
