| 中文摘要 | 第3-5页 |
| 英文摘要 | 第5-7页 |
| 1 引言和文献综述 | 第12-27页 |
| 1.1 心脏发育过程 | 第12-13页 |
| 1.2 心脏发育与转录因子 | 第13-16页 |
| 1.2.1 GATA | 第13-14页 |
| 1.2.2 Nkx2.5 | 第14页 |
| 1.2.3 MEF-2家族 | 第14-15页 |
| 1.2.4 HAND基因 | 第15页 |
| 1.2.5 BMP家族 | 第15-16页 |
| 1.3 心脏的左右不对称发育 | 第16-22页 |
| 1.3.1 心脏左右不对称决定 | 第17页 |
| 1.3.2 心脏自身左右不对称发育 | 第17-19页 |
| 1.3.3 与心脏左右不对称发育有关的基因及机制 | 第19-22页 |
| 1.4 本文相关基因在心脏发育中的作用 | 第22-25页 |
| 1.4.1. vmhc基因 | 第22-23页 |
| 1.4.2. z-lefty1基因 | 第23-24页 |
| 1.4.3. charon基因 | 第24页 |
| 1.4.4. 果蝇基因CG8419 | 第24-25页 |
| 1.5 本文的研究意义 | 第25-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-49页 |
| 2.1 材料 | 第27-30页 |
| 2.1.1 酶类和试剂盒 | 第27页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第27-28页 |
| 2.1.3 其他试剂 | 第28页 |
| 2.1.4 主要实验仪器 | 第28-29页 |
| 2.1.5 生物信息学分析的主要软件与数据库 | 第29-30页 |
| 2.2 方法 | 第30-49页 |
| 2.2.1 斑马鱼总RNA的抽提 | 第30-31页 |
| 2.2.2 果蝇总RNA的抽提 | 第31-32页 |
| 2.2.3 PCR cDNA文库的构建 | 第32-33页 |
| 2.2.4 PCR扩增 | 第33页 |
| 2.2.5 反应混合液配制 | 第33页 |
| 2.2.6 PCR反应 | 第33-34页 |
| 2.2.7 PCR产物的纯化回收 | 第34-35页 |
| 2.2.8 PCR产物与T-载体的连接 | 第35页 |
| 2.2.9 感受态细胞的制备 | 第35-36页 |
| 2.2.11 质粒的小量制备 | 第36-37页 |
| 2.2.12 阳性克隆的筛选与鉴定 | 第37页 |
| 2.2.13 测序 | 第37-38页 |
| 2.2.14 表达载体的构建 | 第38-40页 |
| 2.2.15 提取蛋白质 | 第40页 |
| 2.2.16 SDS-PAGE | 第40-41页 |
| 2.2.17 蛋白质印迹免疫检测(Western-blot) | 第41-42页 |
| 2.2.18 重组蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第42页 |
| 2.2.19 带GST标签融合蛋白的纯化 | 第42页 |
| 2.2.20 带HIS标签的重组蛋白的纯化 | 第42-43页 |
| 2.2.21 重组蛋白多克隆抗体的制备 | 第43-44页 |
| 2.2.22 斑马鱼胚胎抗体染色 | 第44页 |
| 2.2.23 果蝇胚胎抗体染色 | 第44-46页 |
| 2.2.24 免疫组化 | 第46-49页 |
| 3 结果与分析 | 第49-75页 |
| 3.1 vmhc的多克隆抗体的制备 | 第49-56页 |
| 3.1.1 PGEX-4T-1-vmhc重组质粒的构建流程图 | 第49-52页 |
| 3.1.2 蛋白表达及纯化 | 第52-54页 |
| 3.1.3 vmhc兔多克隆抗体制备 | 第54页 |
| 3.1.4 兔多克隆抗体的效价测定 | 第54页 |
| 3.1.5 vmhc鼠多克隆抗体制备 | 第54页 |
| 3.1.6 vmhc鼠多克隆抗体的效价测定 | 第54-55页 |
| 3.1.7 免疫组化结果分析 | 第55页 |
| 3.1.8 Vmhc斑马鱼的胚胎抗体染色 | 第55-56页 |
| 3.2 z-Lefty1多克隆抗体的制备 | 第56-61页 |
| 3.2.1 z-lefty1基因片段的获得和重组质粒的构建 | 第56-59页 |
| 3.2.2 z-Lefty1融合蛋白表达纯化 | 第59-60页 |
| 3.2.3 多克隆抗体的制备及效价测定 | 第60-61页 |
| 3.2.4 提斑马鱼各发育时期蛋白分析 | 第61页 |
| 3.3 z-Charon多克隆抗体的制备 | 第61-68页 |
| 3.3.1 z-Charon表达载体的构建 | 第61-64页 |
| 3.3.2 Charon融合蛋白表达纯化 | 第64-65页 |
| 3.3.3 z-Charon重组蛋白的Western-blot鉴定及效价鉴定 | 第65-66页 |
| 3.3.4 提斑马鱼各发育时期蛋白分析 | 第66页 |
| 3.3.5 Charon斑马鱼的胚胎抗体染色 | 第66-68页 |
| 3.4 果蝇基因CG8419的多克隆抗体的制备 | 第68-75页 |
| 3.4.1 CG8419表达载体的构建 | 第68-72页 |
| 3.4.2 CG8419融合蛋白表达纯化 | 第72-73页 |
| 3.4.3 CG8419重组蛋白的Western-blot鉴定及效价鉴定 | 第73-74页 |
| 3.4.4 果蝇组织蛋白分析 | 第74页 |
| 3.4.5 CG8419果蝇胚胎抗体染色 | 第74-75页 |
| 4 讨论 | 第75-80页 |
| 结语 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-92页 |
| 附录1 | 第92-94页 |
| 附录2 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
