| 中文摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第1章 绪论 | 第13-24页 |
| 1.1 研究背景 | 第13-17页 |
| 1.1.1 干扰素的发现及产生机理 | 第13页 |
| 1.1.2 干扰素的分类及作用 | 第13页 |
| 1.1.3 β干扰素的研究进展 | 第13-17页 |
| 1.2 蛋白质的聚乙二醇修饰 | 第17-20页 |
| 1.2.1 PEG 的性质 | 第17-18页 |
| 1.2.2 聚乙二醇修饰反应类型 | 第18-19页 |
| 1.2.3 PEG 的应用 | 第19-20页 |
| 1.2.4 PEG 修饰药物 | 第20页 |
| 1.3 前期研究 | 第20-21页 |
| 1.3.1 以pET-3c 质粒为载体构建表达的重组人β-IFN-1b 的研究 | 第20-21页 |
| 1.3.2 以PMAL-C2X 质粒为载体构建的融合表达MBP-EK-β-IFN-1b 的研究 | 第21页 |
| 1.4 立题依据及研究内容 | 第21-23页 |
| 1.4.1 立题依据 | 第21页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第21-23页 |
| 1.5 本课题的研究技术路线图 | 第23-24页 |
| 第2章 融合表达重组人Β-IFN-1B 重组工程菌的筛选 | 第24-64页 |
| 第1部分 载体及宿主菌的选择 | 第24-25页 |
| 2.1 目的 | 第24-25页 |
| 2.1.1 载体及宿主菌的选择依据 | 第24页 |
| 2.1.2 不同蛋白酶酶切体系的筛选 | 第24-25页 |
| 第2部分 融合表达重组人Β-IFN-1B 的重组质粒的构建 | 第25-47页 |
| 2.2 引言 | 第25-47页 |
| 2.2.1 材料与仪器 | 第25-28页 |
| 2.2.2 方法 | 第28-40页 |
| 2.2.3 结果 | 第40-47页 |
| 2.2.4 小结 | 第47页 |
| 第3部分 重组工程菌的表达 | 第47-54页 |
| 2.3 引言 | 第47-54页 |
| 2.3.1 材料与仪器 | 第47-50页 |
| 2.3.2 重组质粒的表达方法 | 第50-53页 |
| 2.3.3 结果 | 第53-54页 |
| 2.3.4 小结 | 第54页 |
| 第4部分 融合蛋白的纯化及酶切 | 第54-64页 |
| 2.4 引言 | 第54-63页 |
| 2.4.1 材料与仪器 | 第55-56页 |
| 2.4.2 融合蛋白TRX-TEV-β-IFN-1b 的纯化以及TEV 酶酶切 | 第56-58页 |
| 2.4.3 融合蛋白TRX-EK-β-IFN-1b 的纯化以及EK 酶酶切 | 第58-60页 |
| 2.4.4 融合蛋白TRX-thrombin-β-IFN-1b 的纯化以及thrombin 酶酶切 | 第60-62页 |
| 2.4.5 小结 | 第62-63页 |
| 2.5 讨论 | 第63-64页 |
| 第3章 重组人Β-IFN-1B 的制备 | 第64-72页 |
| 3.1 引言 | 第64页 |
| 3.2 材料与仪器 | 第64-65页 |
| 3.2.1 菌株 | 第64页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第64-65页 |
| 3.2.3 主要仪器 | 第65页 |
| 3.2.4 主要试剂配制 | 第65页 |
| 3.3 工程菌的发酵方案 | 第65-66页 |
| 3.3.1 种子菌的活化 | 第65-66页 |
| 3.3.2 种子液 | 第66页 |
| 3.3.3 不同温度对融合蛋白表达量的影响 | 第66页 |
| 3.3.4 不同剂量诱导剂对融合蛋白表达量的影响 | 第66页 |
| 3.4 Β-IFN-1B 的制备 | 第66-67页 |
| 3.4.1 破菌及Ni 柱纯化 | 第66-67页 |
| 3.4.2 融合蛋白TRX-EK-β-IFN-1b 的酶切 | 第67页 |
| 3.4.3 酶切后rhIFN-β-1b 的反相纯化 | 第67页 |
| 3.4.4 重组人β干扰素-1b 的SP 回收 | 第67页 |
| 3.5 结果 | 第67-71页 |
| 3.5.1 发酵表达 | 第67-68页 |
| 3.5.2 破菌后Ni 柱纯化 | 第68-69页 |
| 3.5.3 融合蛋白的酶切 | 第69页 |
| 3.5.4 反相C18 精纯化 | 第69-70页 |
| 3.5.5 SP 回收rhIFN-β-1b | 第70-71页 |
| 3.6 讨论 | 第71-72页 |
| 第4章 PEG-Β-IFN-1B 的制备 | 第72-77页 |
| 4.1 引言 | 第72页 |
| 4.2 实验材料 | 第72页 |
| 4.3 方法 | 第72-74页 |
| 4.3.1 Lowry 法测定样品浓度 | 第72-73页 |
| 4.3.2 PEG 修饰及单一修饰产物的制备 | 第73-74页 |
| 4.4 结果 | 第74-76页 |
| 4.4.1 蛋白浓度结果计算 | 第74页 |
| 4.4.2 不同修饰剂的修饰结果 | 第74-75页 |
| 4.4.3 N 端修饰产物的分离纯化 | 第75-76页 |
| 4.5 讨论 | 第76-77页 |
| 第5章 体外抗病毒活性 | 第77-81页 |
| 5.1 引言 | 第77页 |
| 5.2 主要试剂及仪器 | 第77页 |
| 5.3 主要试剂的配制 | 第77页 |
| 5.4 材料与方法 | 第77-79页 |
| 5.4.1 细胞和病毒 | 第77-78页 |
| 5.4.2 样品 | 第78页 |
| 5.4.3 方法 | 第78页 |
| 5.4.4 活性计算 | 第78-79页 |
| 5.5 结果 | 第79-80页 |
| 5.6 讨论 | 第80-81页 |
| 总结 | 第81-82页 |
| 附图 | 第82-85页 |
| 参考文献 | 第85-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 附录 | 第89页 |
