| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-28页 |
| 一、植原体(phytoplasma)及植原体病害的研究进展 | 第14-16页 |
| 1. 植原体病害研究 | 第15页 |
| 2. 植原体基因组 | 第15-16页 |
| 二、植原体的分子生物学检测方法 | 第16-19页 |
| 1. PCR检测 | 第16-17页 |
| 2. 环介导等温扩增技术 | 第17页 |
| 3. DNA条形码技术 | 第17-18页 |
| 4. 限制性片段多态性分析 | 第18页 |
| 5. 单链构象多态性分析 | 第18-19页 |
| 6. 微阵列分析 | 第19页 |
| 三、植原体的分类 | 第19-20页 |
| 1. 植原体的分类学研究历史 | 第19页 |
| 2. 植原体的分类 | 第19-20页 |
| 四、植原体的致病因子及分泌系统 | 第20-22页 |
| 4.1 植原体的毒力因子TENGU | 第20-21页 |
| 4.2 植原体的抗原膜蛋白(Amp) | 第21页 |
| 4.3 植原体的sec分泌系统 | 第21-22页 |
| 五、本研究的主要内容、目的及意义 | 第22-23页 |
| 参考文献 | 第23-28页 |
| 第一章 南京地区几种植原体的检测与鉴定 | 第28-54页 |
| 第一节 构树黄化卷叶病植原体的检测与鉴定 | 第28-39页 |
| 前言 | 第28-29页 |
| 1 材料与方法 | 第29-33页 |
| 1.1 材料与主要试剂 | 第29页 |
| 1.2 患病枣树、患病构树和健康构树总DNA提取 | 第29-30页 |
| 1.3 引物的合成 | 第30页 |
| 1.4 直接PCR与巢式PCR | 第30-32页 |
| 1.5 PCR产物的纯化与克隆 | 第32页 |
| 1.6 阳性转化子的获取 | 第32-33页 |
| 1.7 目的片段的测序与同源性比较 | 第33页 |
| 1.8 虚拟RFLP分析 | 第33页 |
| 1.9 16S rDNA,rp,tuf基因的系统发育学分析 | 第33页 |
| 2 结果分析 | 第33-37页 |
| 2.1 构树感染植原体后的症状 | 第33-34页 |
| 2.2 构树黄化卷叶病植原体16S rDNA、rp、tuf secY基因的PCR扩增 | 第34-35页 |
| 2.3 构树黄化卷叶病植原体的16S rDNA,rp,tuf等基因的同源性分析 | 第35-36页 |
| 2.4 基于构树黄化卷叶病植原体16S rDNA、rp以及tuf基因的系统发育学分析 | 第36-37页 |
| 3 小结与讨论 | 第37-39页 |
| 第二节 三角槭黄化病等几种植原体的16S rDNA的检测与分类 | 第39-47页 |
| 前言 | 第39-40页 |
| 1 材料与方法 | 第40-41页 |
| 1.1 材料与主要试剂 | 第40页 |
| 1.2 患病及健康植株总DNA的提取 | 第40页 |
| 1.3 引物合成 | 第40页 |
| 1.4 直接PCR与巢式PCR | 第40-41页 |
| 1.5 PCR产物回收与克隆 | 第41页 |
| 1.6 目的片段的测序与序列同源性比较 | 第41页 |
| 1.7 16S rDNA的系统发育学分析 | 第41页 |
| 2 结果与分析 | 第41-45页 |
| 2.1 感病植株的症状 | 第41-42页 |
| 2.2 感病植株中植原体16S rDNA的PCR扩增 | 第42-43页 |
| 2.3 感病植株中植原体16S rDNA的序列同源性比对及系统发育学分析 | 第43-45页 |
| 3 小结与讨论 | 第45-47页 |
| 本章小结与讨论 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 第二章 构树黄化卷叶病植原体TENGU毒力因子的初步研究 | 第54-66页 |
| 前言 | 第54-55页 |
| 1 材料与方法 | 第55-58页 |
| 1.1 实验材料及主要试剂 | 第55页 |
| 1.2 实验方法 | 第55-58页 |
| 2 结果与分析 | 第58-62页 |
| 2.1 TENGU基因的扩增 | 第58页 |
| 2.2 TENGU基因的克隆及序列分析 | 第58-59页 |
| 2.3 TENGU基因植物表达载体的构建 | 第59-60页 |
| 2.4 转基因拟南芥植株的获得 | 第60-61页 |
| 2.5 转基因植株的分子鉴定 | 第61-62页 |
| 3 小结与讨论 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-66页 |
| 第三章 构树黄化卷叶病植原体sec分泌系统3个亚基的克隆及其蛋白特性的分析 | 第66-80页 |
| 前言 | 第66-67页 |
| 1 材料与方法 | 第67-69页 |
| 1.1 实验试剂 | 第67页 |
| 1.2 菌株与质粒 | 第67页 |
| 1.3 构树DNA的提取 | 第67页 |
| 1.4 sec分泌系统3个亚基基因的PCR扩增 | 第67-68页 |
| 1.5 pMD 19-T-sec重组载体的构建 | 第68页 |
| 1.6 测序及同源性比对 | 第68-69页 |
| 2 结果与分析 | 第69-75页 |
| 2.1 secA、secY和secE基因序列测定及分析 | 第69-71页 |
| 2.2 secA、secY和secE的生物信息学分析 | 第71-75页 |
| 3 小结与讨论 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-80页 |
| 第四章 构树黄化卷叶病植原体抗原膜蛋白(Amp)的克隆及外源表达 | 第80-96页 |
| 前言 | 第80-81页 |
| 1 材料与方法 | 第81-87页 |
| 1.1 材料与试剂 | 第81-82页 |
| 1.2 方法 | 第82-87页 |
| 2 结果与分析 | 第87-91页 |
| 2.1 植原体抗原膜蛋白Amp基因的扩增与质粒的提取 | 第87-88页 |
| 2.2 重组表达载体pET-28a(+)-Amp的验证 | 第88-89页 |
| 2.3 Amp蛋白的表达及纯化 | 第89-91页 |
| 3 小结与讨论 | 第91-93页 |
| 参考文献 | 第93-96页 |
| 第五章 感染植原体的构树的抗氧化相关酶活的变化 | 第96-110页 |
| 前言 | 第96-97页 |
| 1. 材料与方法 | 第97-100页 |
| 1.1 材料 | 第97页 |
| 1.2 方法 | 第97-100页 |
| 2. 结果与分析 | 第100-104页 |
| 2.1 多酚氧化酶(PPO)活性 | 第100-101页 |
| 2.2 过氧化物酶(POD)活性 | 第101-102页 |
| 2.3 过氧化氢酶(CAT)活性 | 第102-103页 |
| 2.4 超氧化物歧化酶(SOD)活性 | 第103页 |
| 2.5 丙二醛(MDA)含量 | 第103-104页 |
| 3. 小结与讨论 | 第104-107页 |
| 参考文献 | 第107-110页 |
| 全文总结 | 第110-112页 |
| 一、本文获得的主要结果 | 第110页 |
| 二、本文的主要创新点 | 第110-111页 |
| 三、尚待解决的问题 | 第111-112页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文 | 第112-114页 |
| 致谢 | 第114页 |
