| 中文摘要 | 第3-7页 |
| abstract | 第7-11页 |
| 前言 | 第20-25页 |
| 第一部分 STZ诱导的Ⅰ型DM大鼠心脏损伤时O-GlcNAc修饰水平及自噬流的变化 | 第25-50页 |
| 一、材料与方法 | 第25-32页 |
| 1.实验所需设备及仪器 | 第25-26页 |
| 2.实验动物 | 第26-27页 |
| 3.主要试剂及配置 | 第27-32页 |
| 二、实验方法 | 第32-37页 |
| 1.建立Ⅰ型糖尿病大鼠模型及一般情况的观测 | 第32页 |
| 2.大鼠心功能测量 | 第32-33页 |
| 3.大鼠心脏标本处理及病理切片制作 | 第33页 |
| 4.免疫组织化学染色 | 第33-34页 |
| 5.心肌组织蛋白提取和蛋白分离提纯 | 第34-35页 |
| 6.BCA蛋白浓度测定 | 第35页 |
| 7.SDS-PAGE蛋白凝胶电泳与转膜 | 第35-36页 |
| 8.蛋白质印记抗体标记与免疫显色 | 第36-37页 |
| 9.透射电子显微镜检测自噬小体 | 第37页 |
| 10.统计学分析 | 第37页 |
| 三、实验结果 | 第37-47页 |
| 1.两组大鼠的一般情况 | 第37-38页 |
| 2.两组大鼠的心脏功能 | 第38-40页 |
| 3.两组大鼠的心肌结构改变 | 第40-43页 |
| 4.Ⅰ型DM大鼠O-GlcNAc糖基化修饰水平的变化 | 第43-45页 |
| 5.Ⅰ型DM大鼠心肌自噬的变化 | 第45-47页 |
| 四、讨论 | 第47-48页 |
| 五、结论 | 第48-50页 |
| 第二部分 在体实验验证O-GlcNAc修饰调控自噬流影响糖尿病心脏损伤 | 第50-70页 |
| 一、材料与方法 | 第50-57页 |
| 1.实验所需设备及仪器 | 第50-51页 |
| 2.实验动物 | 第51-52页 |
| 3.主要试剂及其配置 | 第52-57页 |
| 二、实验方法 | 第57-59页 |
| 1.Ⅰ型DM大鼠给药后一般情况的观测 | 第57页 |
| 2.各组大鼠心功能测量 | 第57页 |
| 3.各种大鼠心脏标本处理及病理切片制作 | 第57页 |
| 4.各组大鼠心肌免疫组织化学染色 | 第57-58页 |
| 5.各组大鼠心肌组织蛋白提取和蛋白分离提纯 | 第58页 |
| 6.BCA蛋白浓度测定 | 第58页 |
| 7.SDS-PAGE蛋白凝胶电泳与转膜 | 第58页 |
| 8.蛋白质印记抗体标记与免疫显色 | 第58页 |
| 9.透射电子显微镜检测自噬小体 | 第58页 |
| 10.统计学分析 | 第58-59页 |
| 三、实验结果 | 第59-67页 |
| 1.Don及TG处理后各组大鼠的一般状况 | 第59-60页 |
| 2.Don 及 TG 处理后各组大鼠的心脏功能 | 第60-62页 |
| 3.Don及TG处理后大鼠心肌结构的改变 | 第62-64页 |
| 4.Don及TG处理后大鼠心肌O-GlcNAc糖基化水平的变化 | 第64-65页 |
| 5.Don及TG处理后后大鼠心肌自噬水平的变化 | 第65-67页 |
| 四、讨论 | 第67-68页 |
| 五、结论 | 第68-70页 |
| 第三部分 离体实验研究O-GlcNAc修饰调控自噬流的具体环节及分子机制 | 第70-96页 |
| 一、材料与方法 | 第70-78页 |
| 1.实验所需设备和仪器 | 第70-71页 |
| 2.实验对象 | 第71-72页 |
| 3.主要试剂及配置 | 第72-78页 |
| 二、实验方法 | 第78-83页 |
| 1.乳鼠原代心肌细胞(Neonatalratcardimyocyte,NRCMs)的分离与培养. | 第78页 |
| 2.高糖刺激及药物处理乳鼠原代心肌细胞 | 第78-79页 |
| 3.原代心肌细胞蛋白的分离和提纯 | 第79-80页 |
| 4.BCA蛋白浓度的测定 | 第80页 |
| 5.SDS-PAGE蛋白凝胶电泳 | 第80-81页 |
| 6.蛋白质印记抗体标记与显色 | 第81页 |
| 7.心肌细胞的免疫共沉淀反应 | 第81-82页 |
| 8.腺病毒载体构建 | 第82页 |
| 9.干扰片段的选择和构建 | 第82-83页 |
| 10.统计学分析 | 第83页 |
| 三、实验结果 | 第83-92页 |
| 1.不同条件下NRCMs总蛋白O-GlcNAc修饰水平的变化 | 第83-84页 |
| 2.不同糖浓度及药物作用下NRCMs自噬流的变化 | 第84-85页 |
| 3.NRCMs中沉默OGT或过表达OGA时O-GlcNAc修饰水平降低 | 第85-87页 |
| 4.O-GlcNAc修饰调控NRCMs自噬流的具体环节 | 第87-89页 |
| 5.SNAP29蛋白O-GlcNAc修饰阻碍SNAP29-STX17-VAMP8复合物形成 | 第89-90页 |
| 6.高糖刺激状态下,同时激动或抑制SNAP29O-GlcNAc修饰对SNAP29-STX17-VAMP8复合物形成的影响 | 第90-92页 |
| 四、讨论 | 第92-94页 |
| 五、结论 | 第94-95页 |
| 全文总结 | 第95-96页 |
| 致谢 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-104页 |
| 攻读学位期间发表文章情况 | 第104-106页 |
| 综述 | 第106-117页 |
| 参考文献 | 第112-117页 |
