| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-17页 |
| 1.1 课题的提出 | 第11-12页 |
| 1.2 全基因组测序 | 第12-14页 |
| 1.2.1 概述 | 第12页 |
| 1.2.2 全基因组测序在果树方面应用 | 第12-14页 |
| 1.2.2.1 挖掘重要基因 | 第13-14页 |
| 1.2.2.2 高精度图谱构建及QTL定位 | 第14页 |
| 1.3 全基因组重测序 | 第14-16页 |
| 1.3.1 概述 | 第14页 |
| 1.3.2 基因组重测序的应用 | 第14-16页 |
| 1.3.2.1 进行起源与驯化分析 | 第14-15页 |
| 1.3.2.2 开发分子标记 | 第15页 |
| 1.3.2.3 鉴定突变位点 | 第15-16页 |
| 1.4 本研究内容与意义 | 第16-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-30页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-19页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第17页 |
| 2.1.2 菌株及质粒载体 | 第17-18页 |
| 2.1.3 试剂和仪器 | 第18-19页 |
| 2.1.4 烟草遗传转化培养基配方 | 第19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-30页 |
| 2.2.1 差异基因的验证 | 第19-22页 |
| 2.2.1.1 DNA的提取 | 第19页 |
| 2.2.1.2 引物设计 | 第19页 |
| 2.2.1.3 8%聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测 | 第19页 |
| 2.2.1.4 PCR产物扩增 | 第19-20页 |
| 2.2.1.5 PCR产物纯化 | 第20-21页 |
| 2.2.1.6 AT克隆 | 第21页 |
| 2.2.1.7 连接产物转化大肠杆菌感受态 | 第21-22页 |
| 2.2.1.8 转化后菌液的PCR检测及测序 | 第22页 |
| 2.2.1.9 测序结果分析 | 第22页 |
| 2.2.2 基因表达分析 | 第22-24页 |
| 2.2.2.1 总RNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.2.2.2 第一链cDNA合成 | 第23页 |
| 2.2.2.3 实时荧光定量PCR检测 | 第23-24页 |
| 2.2.2.4 定量引物设计 | 第24页 |
| 2.2.3 超表达载体的构建 | 第24-28页 |
| 2.2.3.1 目的基因全长的获取 | 第25-26页 |
| 2.2.3.2 AT克隆及序列分析 | 第26页 |
| 2.2.3.3 设计重组引物 | 第26页 |
| 2.2.3.4 载体质粒的提取 | 第26页 |
| 2.2.3.5 线性化载体质粒 | 第26-27页 |
| 2.2.3.6 重组反应 | 第27页 |
| 2.2.3.7 转化大肠杆菌 | 第27-28页 |
| 2.2.3.8 阳性验证 | 第28页 |
| 2.2.3.9 质粒提取 | 第28页 |
| 2.2.3.10 质粒转化农杆菌 | 第28页 |
| 2.2.3.11 阳性检测 | 第28页 |
| 2.2.4 烟草的遗传转化 | 第28-30页 |
| 2.2.4.1 烟草叶片的农杆菌侵染与共培养 | 第28-29页 |
| 2.2.4.2 转基因烟草的筛选及生根培养 | 第29页 |
| 2.2.4.3 烟草移栽培养及管理 | 第29-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-49页 |
| 3.1 差异基因的筛选与验证 | 第30-37页 |
| 3.1.1 InDel分级 | 第30页 |
| 3.1.2 8%聚丙烯酰胺凝胶电泳结果 | 第30-32页 |
| 3.1.3 AT克隆测序分析 | 第32-36页 |
| 3.1.4 差异基因变异类型比较 | 第36-37页 |
| 3.2 差异基因序列分析 | 第37-44页 |
| 3.2.1 PtAGO5基因序列分析 | 第37-40页 |
| 3.2.2 PtRZF序列分析 | 第40-41页 |
| 3.2.3 PtCCCHZF序列分析 | 第41-44页 |
| 3.3 差异基因表达分析 | 第44-45页 |
| 3.4 差异基因功能验证 | 第45-49页 |
| 3.4.1 超表达载体的构建 | 第45-46页 |
| 3.4.1.1 目的基因的获取与载体质粒的酶切 | 第45-46页 |
| 3.4.1.2 含目的基因农杆菌检测 | 第46页 |
| 3.4.2 转基因及表型观察 | 第46-49页 |
| 3.4.2.1 农杆菌介导的烟草转化 | 第46-48页 |
| 3.4.2.2 烟草阳性苗的鉴定 | 第48页 |
| 3.4.2.3 烟草表型观察 | 第48-49页 |
| 4 讨论 | 第49-53页 |
| 4.1 重测序分析的准确性 | 第49-50页 |
| 4.2 发育相关差异基因的发掘 | 第50-52页 |
| 4.3 问题及展望 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 附录 | 第59-65页 |
| 致谢 | 第65页 |