| 中文摘要 | 第10-12页 |
| 英文摘要 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-28页 |
| 1.1 植物抗寒基因GPAT | 第15-17页 |
| 1.1.1 GPAT基因应答机制 | 第15页 |
| 1.1.2 GPAT基因研究进展 | 第15-17页 |
| 1.2 植物启动子 | 第17-26页 |
| 1.2.1 启动子概述 | 第17-18页 |
| 1.2.1.1 启动子基本特征 | 第17-18页 |
| 1.2.2 启动子类型 | 第18-22页 |
| 1.2.2.1 组成型启动子 | 第18-19页 |
| 1.2.2.2 组织特异性启动子 | 第19-21页 |
| 1.2.2.3 诱导型启动子 | 第21-22页 |
| 1.2.3 启动子克隆方法 | 第22-24页 |
| 1.2.4 启动子功能研究方法 | 第24-26页 |
| 1.3 百合抗寒的研究进展 | 第26页 |
| 1.4 本试验的目的及意义 | 第26-27页 |
| 1.5 研究技术路线 | 第27-28页 |
| 第二章 岷江百合GPAT基因启动子的克隆及结构预测 | 第28-47页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-29页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第28页 |
| 2.1.2 菌株与克隆载体 | 第28页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第28页 |
| 2.1.4 实验仪器及常用生物学软件 | 第28-29页 |
| 2.1.5 培养基及常用试剂的配置方法 | 第29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-36页 |
| 2.2.1 民江百合的组培 | 第29页 |
| 2.2.2 民江百合基因组DNA的提取 | 第29-30页 |
| 2.2.3 染色体步移法扩增GPAT基因启动子序列 | 第30-35页 |
| 2.2.3.1 接头PCR法克隆启动子序列 | 第30-32页 |
| 2.2.3.2 FPNI-PCR法克隆启动子序列 | 第32-35页 |
| 2.2.4 GPAT基因5'调控序列的测定 | 第35-36页 |
| 2.2.4.1 PCR产物的回收 | 第35页 |
| 2.2.4.2 回收的目的DNA片段与pGM-T的连接 | 第35页 |
| 2.2.4.3 连接产物的的转化和蓝白斑筛选 | 第35页 |
| 2.2.4.4 阳性克隆的PCR鉴定及测序 | 第35-36页 |
| 2.3 结果与分析 | 第36-46页 |
| 2.3.1 岷江百合的组培 | 第36-37页 |
| 2.3.2 岷江百合基因组DNA的提取 | 第37页 |
| 2.3.3 染色体步移法扩增GPAT基因启动子序列 | 第37-43页 |
| 2.3.3.1 第一次接头PCR扩增 | 第37-38页 |
| 2.3.3.2 第二次接头PCR法扩增 | 第38-40页 |
| 2.3.3.3 第一次FPNI-PCR法扩增 | 第40-41页 |
| 2.3.3.4 第二次FPNI-PCR扩增 | 第41-43页 |
| 2.3.4 接头PCR与FPNI-PCR扩增启动子比较 | 第43-44页 |
| 2.3.5 GPAT基因启动子的结构分析 | 第44-46页 |
| 2.4 讨论 | 第46-47页 |
| 第三章 岷江百合GPAT基因启动子缺失表达载体的构建 | 第47-59页 |
| 3.1 实验材料 | 第47-48页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第47页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第47-48页 |
| 3.1.3 主要仪器及生物软件 | 第48页 |
| 3.2 实验方法 | 第48-51页 |
| 3.2.1 GPAT基因启动子5’端缺失片段的克隆 | 第48-49页 |
| 3.2.2 重组表达载体的构建 | 第49-51页 |
| 3.2.2.1 GPAT启动子缺失片段中间载体的构建 | 第49页 |
| 3.2.2.2 GPAT启动子缺失体和pCAMBIA 1304的质粒提取 | 第49-50页 |
| 3.2.2.3 GPAT启动子缺失体质粒和载体pCAMBIA 1304质粒的酶切处理 | 第50页 |
| 3.2.2.4 重组表达载体质粒的构建 | 第50-51页 |
| 3.3 结果与分析 | 第51-58页 |
| 3.3.1 GPAT基因启动子5’端缺失体的克隆 | 第51-52页 |
| 3.3.2 缺失体重组质粒和pCAMBIA1304植物表达载体的双酶切 | 第52-53页 |
| 3.3.3 GFP/GUS融合表达载体的构建及检测 | 第53-58页 |
| 3.4 讨论 | 第58-59页 |
| 第四章 GPAT基因启动子的瞬时表达分析及烟草转化植株的获得和鉴定 | 第59-69页 |
| 4.1 实验材料 | 第59页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第59页 |
| 4.1.2 菌株与表达载体 | 第59页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第59页 |
| 4.1.4 主要仪器及常用生物软件 | 第59页 |
| 4.2 实验方法 | 第59-63页 |
| 4.2.1 烟草组培苗的培养 | 第59-60页 |
| 4.2.2 农杆菌介导转化烟草 | 第60-62页 |
| 4.2.2.1 农杆菌感受态细胞的制备和农杆菌的转化 | 第60-61页 |
| 4.2.2.2 重组农杆菌的鉴定 | 第61-62页 |
| 4.2.3 组织化学染色 | 第62-63页 |
| 4.3 结果与分析 | 第63-65页 |
| 4.3.1 植物表达载体pCAMBIA1304-GPATp导入农杆菌的验证 | 第63页 |
| 4.3.2 GUS报告基因瞬时表达检测启动子的活性 | 第63-65页 |
| 4.4 烟草转化植株的获得 | 第65-68页 |
| 4.4.1 烟草的转化 | 第65页 |
| 4.4.2 烟草转化植株的检测 | 第65-66页 |
| 4.4.2.1 烟草转化植株的DNA提取 | 第65页 |
| 4.4.2.2 PCR检测 | 第65-66页 |
| 4.4.3 结果与分析 | 第66-68页 |
| 4.4.3.1 烟草的转化 | 第66-67页 |
| 4.4.3.2 PCR验证烟草转化植株 | 第67-68页 |
| 4.5 讨论 | 第68-69页 |
| 第五章 结论 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
