| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 中英文对照和缩略词表 | 第16-18页 |
| 第一章 综述 | 第18-40页 |
| 1.1 引言 | 第18页 |
| 1.2 艰难梭菌的感染概况 | 第18-19页 |
| 1.3 艰难梭菌感染的研究现状 | 第19-20页 |
| 1.4 艰难梭菌毒素TcdA和TcdB | 第20-27页 |
| 1.4.1 TcdA和TcdB的结构 | 第20-22页 |
| 1.4.1.1 N-端的葡萄糖基转移酶催化区(GTD) | 第20-21页 |
| 1.4.1.2 半胱氨酸蛋白水解酶区(CPD) | 第21页 |
| 1.4.1.3 跨膜区(TMD) | 第21页 |
| 1.4.1.4 C-端受体结合区(RBD) | 第21-22页 |
| 1.4.2 艰难梭菌毒素TcdA和TcdB的细胞毒性 | 第22-24页 |
| 1.4.3 艰难梭菌毒素TcdA和TcdB的肠毒性 | 第24-25页 |
| 1.4.4 艰难梭菌的二元毒素(CDT) | 第25-26页 |
| 1.4.5 艰难梭菌毒素TcdA和TcdB的调节基因 | 第26-27页 |
| 1.5 免疫细胞及其相关炎症因子在CDI中的作用 | 第27-32页 |
| 1.5.1 免疫细胞在CDI中的作用 | 第27-29页 |
| 1.5.2 艰难梭菌毒素诱导的炎症因子在疾病中的作用 | 第29-32页 |
| 1.6 艰难梭菌感染治疗方法 | 第32-35页 |
| 1.6.1 抗生素治疗 | 第33页 |
| 1.6.2 抗体治疗 | 第33页 |
| 1.6.3 免疫球蛋白治疗 | 第33-34页 |
| 1.6.4 菌群调节治疗 | 第34页 |
| 1.6.5 粪便移植治疗 | 第34页 |
| 1.6.6 手术治疗 | 第34页 |
| 1.6.7 噬菌体治疗 | 第34-35页 |
| 1.7 目前CDI病理学假说的矛盾性 | 第35-36页 |
| 1.8 HMGB1及其在炎症反应中的作用 | 第36-37页 |
| 1.8.1 高迁移率组蛋白B1 | 第36页 |
| 1.8.2 HMGB1的生物学功能 | 第36-37页 |
| 1.9 本课题的目的意义和研究内容 | 第37-40页 |
| 1.9.1 目的意义 | 第37-38页 |
| 1.9.2 研究内容 | 第38-40页 |
| 第二章 突变毒素LA和TcdB-D97的肠毒性研究 | 第40-53页 |
| 2.1 引言 | 第40页 |
| 2.2 材料与方法 | 第40-47页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第40-42页 |
| 2.2.2 溶液的配制 | 第42-43页 |
| 2.2.3 细胞培养方法 | 第43页 |
| 2.2.4 突变毒素质粒的构建 | 第43页 |
| 2.2.5 突变毒素质粒转化 | 第43-44页 |
| 2.2.6 突变毒素的表达和纯化 | 第44页 |
| 2.2.7 突变毒素的细胞毒性 | 第44页 |
| 2.2.8 回肠结扎实验 | 第44-45页 |
| 2.2.9 髓过氧化物酶(MPO)分析 | 第45-46页 |
| 2.2.10 荧光定量PCR(RT-PCR)分析 | 第46-47页 |
| 2.2.11 组织病理实验 | 第47页 |
| 2.2.12 数据分析 | 第47页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第47-52页 |
| 2.3.1 突变毒素的表达及纯化 | 第47-48页 |
| 2.3.2 突变毒素的细胞毒性 | 第48-49页 |
| 2.3.3 毒素突变毒素的肠毒性 | 第49-52页 |
| 2.4 本章小结 | 第52-53页 |
| 第三章 葡萄糖基转移酶活性区与肠炎症的关系 | 第53-59页 |
| 3.1 引言 | 第53页 |
| 3.2 材料与方法 | 第53-55页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第53页 |
| 3.2.2 溶液的配制 | 第53-54页 |
| 3.2.3 细胞培养方法 | 第54页 |
| 3.2.4 突变毒素的表达和纯化 | 第54页 |
| 3.2.5 蛋白质印迹法(western blot)分析 | 第54页 |
| 3.2.6 六磷酸肌醇(InsP6)诱导的毒素自身水解 | 第54页 |
| 3.2.7 在无细胞体系中检测毒素葡萄糖基转移酶活性 | 第54-55页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第55-58页 |
| 3.3.1 突变毒素的半胱氨酸蛋白酶活性 | 第55-56页 |
| 3.3.2 突变毒素的葡萄糖基转移酶活性 | 第56-57页 |
| 3.3.3 突变毒素不能将GTD活性区运送到宿主细胞的胞质中 | 第57-58页 |
| 3.4 本章小结 | 第58-59页 |
| 第四章 细胞膜表面Rac1磷酸化与肠炎症的关系 | 第59-67页 |
| 4.1 引言 | 第59页 |
| 4.2 材料与方法 | 第59-60页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第59页 |
| 4.2.2 溶液的配制 | 第59页 |
| 4.2.3 细胞培养方法 | 第59页 |
| 4.2.4 突变毒素的表达和纯化 | 第59页 |
| 4.2.5 突变毒素的细胞毒性 | 第59页 |
| 4.2.6 回肠结扎实验 | 第59-60页 |
| 4.2.7 髓过氧化物酶 (MPO)分析 | 第60页 |
| 4.2.8 荧光定量PCR(RT-PCR)分析 | 第60页 |
| 4.2.9 组织病理实验 | 第60页 |
| 4.2.10 蛋白质印迹法(western blot)分析 | 第60页 |
| 4.2.11 数据分析 | 第60页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第60-66页 |
| 4.3.1 TUDCA可以抑制TcdB诱导的细胞变圆 | 第60-61页 |
| 4.3.2 TUDCA和TcdB混合注入可以引起肠炎症 | 第61-64页 |
| 4.3.3 突变毒素的葡萄糖基转移酶活性 | 第64-65页 |
| 4.3.4 细胞膜表面Rac1磷酸化和肠炎症的关系 | 第65-66页 |
| 4.4 本章小结 | 第66-67页 |
| 第五章 葡萄糖基转移酶活性区的活性与肠炎症的关系 | 第67-78页 |
| 5.1 引言 | 第67页 |
| 5.2 材料与方法 | 第67-68页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第67页 |
| 5.2.2 溶液的配制 | 第67页 |
| 5.2.3 细胞培养方法 | 第67页 |
| 5.2.4 突变毒素的表达和纯化 | 第67页 |
| 5.2.5 突变毒素的细胞毒性 | 第67页 |
| 5.2.6 回肠结扎实验 | 第67-68页 |
| 5.2.7 髓过氧化物酶(MPO)分析 | 第68页 |
| 5.2.8 荧光定量PCR(RT-PCR)分析 | 第68页 |
| 5.2.9 组织病理实验 | 第68页 |
| 5.2.10 数据分析 | 第68页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第68-76页 |
| 5.3.1 突变毒素aTcdB的细胞毒性 | 第68-69页 |
| 5.3.2 突变毒素aTcdB的肠毒性 | 第69-70页 |
| 5.3.3 突变毒素aTcdB和TUDCA混合的肠毒性 | 第70-73页 |
| 5.3.4 细胞膜上Rac1磷酸化与肠毒性的关系 | 第73-76页 |
| 5.4 本章小结 | 第76-78页 |
| 第六章 跨膜区25个氨基酸片段与细胞膜Rac1磷酸化的关系 | 第78-85页 |
| 6.1 引言 | 第78页 |
| 6.2 材料与方法 | 第78-79页 |
| 6.2.1 实验材料 | 第78页 |
| 6.2.2 溶液的配制 | 第78页 |
| 6.2.3 细胞培养方法 | 第78页 |
| 6.2.4 突变毒素的细胞毒性和细胞变圆检测 | 第78页 |
| 6.2.5 回肠结扎实验 | 第78页 |
| 6.2.6 髓过氧化物酶 (MPO)分析 | 第78-79页 |
| 6.2.7 荧光定量PCR(RT-PCR)分析 | 第79页 |
| 6.2.8 组织病理实验 | 第79页 |
| 6.2.9 蛋白印迹法(western blot)分析 | 第79页 |
| 6.2.10 数据分析 | 第79页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第79-83页 |
| 6.3.1 含有跨膜区25个氨基酸的多肽可以抑制TUDCA的生物活性 | 第79-80页 |
| 6.3.2 含有跨膜区25个氨基酸的多肽和TUDCA和TcdB混合注射小鼠回肠内的肠毒性研究 | 第80-83页 |
| 6.4 本章小结 | 第83-85页 |
| 第七章 炎症因子HMGB1对TcdA诱导的肠炎症的影响 | 第85-93页 |
| 7.1 引言 | 第85页 |
| 7.2 材料与方法 | 第85-86页 |
| 7.2.1 实验材料 | 第85页 |
| 7.2.2 溶液的配制 | 第85页 |
| 7.2.3 细胞培养方法 | 第85页 |
| 7.2.4 蛋白印迹法(western blot)分析 | 第85页 |
| 7.2.5 突变毒素的细胞毒性 | 第85页 |
| 7.2.6 回肠结扎实验 | 第85页 |
| 7.2.7 髓过氧化物酶 (MPO)分析 | 第85-86页 |
| 7.2.8 荧光定量PCR(RT-PCR)分析 | 第86页 |
| 7.2.9 组织病理实验 | 第86页 |
| 7.2.10 数据分析 | 第86页 |
| 7.3 结果与讨论 | 第86-92页 |
| 7.3.1 TcdA可以诱导HMGB1的分泌 | 第86-87页 |
| 7.3.2 炎症因子HMGB1的肠毒性研究 | 第87-89页 |
| 7.3.3 炎症因子HMGB1参与了TcdA诱导的肠毒性 | 第89-92页 |
| 7.4 本章小结 | 第92-93页 |
| 结论与展望 | 第93-96页 |
| 结论 | 第93-94页 |
| 创新性成果 | 第94页 |
| 展望 | 第94-96页 |
| 参考文献 | 第96-114页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第114-116页 |
| 致谢 | 第116-117页 |
| 附件 | 第117页 |
