| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第9-23页 |
| 1.1 来源于海洋微生物的抗肿瘤活性产物的研究进展 | 第9-13页 |
| 1.1.1 具有抗肿瘤活性的海洋细菌次级代谢产物 | 第10-11页 |
| 1.1.2 具有抗肿瘤活性的海洋放线菌次级代谢产物 | 第11页 |
| 1.1.3 具有抗肿瘤活性的海洋真菌次级代谢产物 | 第11-13页 |
| 1.2 常见生物活性多肽或蛋白的分离纯化手段 | 第13-15页 |
| 1.3 海洋来源的多肽或蛋白抗肿瘤作用机理 | 第15-18页 |
| 1.3.1 诱导细胞凋亡 | 第16-17页 |
| 1.3.2 以肿瘤新生血管为靶点 | 第17-18页 |
| 1.3.3 影响微管蛋白的形成 | 第18页 |
| 1.4 β-葡聚糖酶的来源 | 第18-20页 |
| 1.4.1 来源于细菌的β-葡聚糖酶 | 第19-20页 |
| 1.4.2 来源于真菌的β-葡聚糖酶 | 第20页 |
| 1.4.3 来源于动物的β-葡聚糖酶 | 第20页 |
| 1.5 β-葡聚糖酶抗肿瘤作用 | 第20-21页 |
| 1.6 本研究的目的与意义 | 第21页 |
| 1.7 本研究课题的来源及主要研究内容 | 第21-23页 |
| 1.7.1 课题来源 | 第21页 |
| 1.7.2 主要研究内容 | 第21-23页 |
| 第二章 南极表层海水中抗肿瘤微生物的筛选及菌种鉴定 | 第23-33页 |
| 2.1 材料 | 第23-25页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第23页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.3 培养基 | 第24页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第24-25页 |
| 2.2 方法 | 第25-28页 |
| 2.2.1 5 株南极菌株的发酵 | 第25页 |
| 2.2.2 肿瘤细胞培养 | 第25页 |
| 2.2.3 MTT法测定发酵液活性 | 第25-26页 |
| 2.2.4 菌株的鉴定 | 第26-28页 |
| 2.3 结果与分析 | 第28-32页 |
| 2.3.1 南极抗肿瘤微生物的筛选结果 | 第28页 |
| 2.3.2 菌株N6-2 的菌种鉴定 | 第28-30页 |
| 2.3.3 菌株N6-2 的 16S rDNA序列 | 第30-31页 |
| 2.3.4 菌株的生理生化实验结果 | 第31-32页 |
| 2.4 本章小结与讨论 | 第32-33页 |
| 第三章 海洋芽孢杆菌N6-2 活性蛋白的纯化与鉴定 | 第33-47页 |
| 3.1 材料 | 第33-35页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第33页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第33-34页 |
| 3.1.3 培养基 | 第34页 |
| 3.1.4 溶剂 | 第34-35页 |
| 3.1.5 实验仪器 | 第35页 |
| 3.2 方法 | 第35-39页 |
| 3.2.1 菌株的发酵 | 第35页 |
| 3.2.2 超滤法粗提活性物质 | 第35页 |
| 3.2.3 硫酸铵分步沉淀法浓缩活性物质 | 第35-36页 |
| 3.2.4 离子交换色谱法提取活性组分 | 第36页 |
| 3.2.5 活性蛋白NCBG纯度检测 | 第36-37页 |
| 3.2.6 ESI质谱检测活性蛋白NCBG的分子量 | 第37页 |
| 3.2.7 活性蛋白NCBG的N端序列测定 | 第37-38页 |
| 3.2.8 活性蛋白NCBG串联质谱分析 | 第38页 |
| 3.2.9 N6-2 菌株基因组的提取 | 第38页 |
| 3.2.10 活性蛋白NCBG基因的克隆 | 第38-39页 |
| 3.3 结果与分析 | 第39-45页 |
| 3.3.1 超滤得到活性组分 | 第39页 |
| 3.3.2 硫酸铵沉淀得到活性组分 | 第39-40页 |
| 3.3.3 采用离子交换色谱分离纯化活性蛋白NCBG | 第40-41页 |
| 3.3.4 高效液相色谱检测活性蛋白NCBG纯度 | 第41-42页 |
| 3.3.5 SDS-PAGE检测活性蛋白NCBG的纯度 | 第42-43页 |
| 3.3.6 ESI质谱测定活性蛋白NCBG的分子量 | 第43页 |
| 3.3.7 活性蛋白NCBG的串联质谱结果 | 第43-44页 |
| 3.3.8 活性蛋白NCBG的N端氨基酸序列测定结果 | 第44页 |
| 3.3.9 编码NCBG基因的克隆 | 第44-45页 |
| 3.4 本章小结与讨论 | 第45-47页 |
| 第四章 NCBG的活性测定 | 第47-61页 |
| 4.1 材料 | 第47-48页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第47页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第47页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第47-48页 |
| 4.2 方法 | 第48-52页 |
| 4.2.1 NCBG对肿瘤细胞体外增殖的抑制作用 | 第48页 |
| 4.2.2 NCBG对肿瘤细胞表型的影响 | 第48页 |
| 4.2.3 NCBG对A549细胞迁移和侵袭的影响 | 第48-49页 |
| 4.2.4 NCBG酶活性的测定及酶学特性研究 | 第49-52页 |
| 4.3 结果与分析 | 第52-57页 |
| 4.3.1 NCBG对肿瘤细胞的体外抑制作用 | 第52-53页 |
| 4.3.2 NCBG抑制肿瘤细胞A549的体外侵袭与迁移 | 第53-54页 |
| 4.3.3 活性蛋白NCBG酶活及其酶学特性 | 第54-57页 |
| 4.4 本章小结与讨论 | 第57-61页 |
| 本文结论 | 第61-63页 |
| 展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 附录 | 第71-75页 |
| 1.肿瘤细胞的复苏 | 第71页 |
| 2.细胞传代培养 | 第71页 |
| 3.细胞计数 | 第71-72页 |
| 4.细胞冻存 | 第72页 |
| 5.抗肿瘤活性检测 | 第72-73页 |
| 6.蛋白多肽浓度测定 | 第73-74页 |
| 7.葡萄糖标准曲线的绘制 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75-77页 |
| 攻读学位期间发表学术论文目录 | 第77-79页 |
