| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-27页 |
| 1.1 2-苯乙醇的合成方法 | 第12-13页 |
| 1.2 2-苯乙醇生化合成途径与基因工程育种的研究 | 第13-16页 |
| 1.3 影响酵母菌合成2-苯乙醇的各种因素 | 第16-17页 |
| 1.4 产物抑菌作用是酵母生物合成2-苯乙醇的瓶颈之一 | 第17-19页 |
| 1.5 酵母酒精耐受性机理的研究进展 | 第19-24页 |
| 1.6 诱变育种提高酵母2-苯乙醇耐受性 | 第24-26页 |
| 1.7 选题背景和意义 | 第26-27页 |
| 第二章 高耐受性高产2-苯乙醇酵母出发菌株的筛选 | 第27-36页 |
| 2.1 材料与方法 | 第28-31页 |
| 2.1.1 菌株 | 第28页 |
| 2.1.2 培养基 | 第28-29页 |
| 2.1.3 试剂和器材 | 第29页 |
| 2.1.4 方法 | 第29-31页 |
| 2.1.4.1 实验室保藏菌株耐受性的考察方法 | 第29页 |
| 2.1.4.2 实验室保藏菌产量的快速检测方法 | 第29-31页 |
| 2.2 结果 | 第31-35页 |
| 2.2.1 实验室保藏菌株耐受性的考察 | 第31-33页 |
| 2.2.2 实验室保藏菌产量的考察 | 第33-35页 |
| 2.3 诱变出发菌株的选择 | 第35-36页 |
| 第三章 S.cerevisiae CWY132菌株2—苯乙醇耐受性影响因素的考察 | 第36-47页 |
| 3.1 材料与方法 | 第36-39页 |
| 3.1.1 菌株 | 第36页 |
| 3.1.2 培养基 | 第36页 |
| 3.1.3 试剂和器材 | 第36-37页 |
| 3.1.4 方法 | 第37-39页 |
| 3.1.4.1 S.cerevisiae CWY132对2-苯乙醇耐受性的考察方法 | 第37页 |
| 3.1.4.2 S.cerevisiae CWY132对2-苯乙醇耐受性条件的摸索 | 第37-39页 |
| 3.2 结果: | 第39-46页 |
| 3.2.1 S.cerevisiae CWY132对2-苯乙醇耐受性的考察 | 第39-42页 |
| 3.2.2 S.cerevisiae CWY132对2-苯乙醇耐受性条件的摸索 | 第42-46页 |
| 3.3 总结 | 第46-47页 |
| 第四章 诱变育种提高酵母2-苯乙醇耐受性和产量 | 第47-74页 |
| 4.1 第一轮诱变育种 | 第47-59页 |
| 4.1.1 材料和方法 | 第47-50页 |
| 4.1.1.1 菌株 | 第47页 |
| 4.1.1.2 培养基和培养条件 | 第47页 |
| 4.1.1.3 主要试剂和仪器 | 第47页 |
| 4.1.1.4 CWY132与GER紫外致死率曲线的制作 | 第47-48页 |
| 4.1.1.5 诱变处理及耐受性突变菌株的液体筛选方法 | 第48-49页 |
| 4.1.1.6 耐受性突变菌株的固体筛选方法 | 第49页 |
| 4.1.1.7 耐受性与2-苯乙醇产量关系的考察 | 第49-50页 |
| 4.1.2 结果与讨论 | 第50-58页 |
| 4.1.2.1 CWY132与GER紫外诱变致死曲线 | 第50-52页 |
| 4.1.2.2 耐受性突变菌株的固液体筛选结果 | 第52页 |
| 4.1.2.3 耐受性突变菌株的筛选 | 第52-55页 |
| 4.1.2.4 2-苯乙醇耐受性突变菌株的遗传稳定性 | 第55-56页 |
| 4.1.2.5 耐受性与2-苯乙醇产量关系的考察 | 第56-58页 |
| 4.1.3 总结 | 第58-59页 |
| 4.2 第二轮诱变育种 | 第59-71页 |
| 4.2.1 材料与方法 | 第59-62页 |
| 4.2.1.1 菌株 | 第59页 |
| 4.2.1.2 培养基和培养条件 | 第59页 |
| 4.2.1.3 第二轮紫外诱变 | 第59-60页 |
| 4.2.1.4 ~(60)Coγ射线诱变育种 | 第60-61页 |
| 4.2.1.5 离子束诱变育种 | 第61-62页 |
| 4.2.2 结果与讨论 | 第62-71页 |
| 4.2.2.1 第二轮紫外诱变结果 | 第62-64页 |
| 4.2.2.2 ~(60)Coγ射线诱变育种 | 第64-67页 |
| 4.2.2.3 离子束诱变育种 | 第67-71页 |
| 4.3 耐受性与2-苯乙醇产量关系的考察 | 第71-72页 |
| 4.4 诱变方法比较 | 第72-74页 |
| 第五章 利用均匀设计法优化发酵培养基 | 第74-79页 |
| 5.1 材料与方法 | 第74-75页 |
| 5.1.1 菌株 | 第74页 |
| 5.1.2 培养基及培养条件 | 第74-75页 |
| 5.1.3 分析方法 | 第75页 |
| 5.1.3.1 实验设计 | 第75页 |
| 5.1.3.2 产物检测 | 第75页 |
| 5.2 结果与分析 | 第75-77页 |
| 5.2.1 均匀设计方案及检测结果 | 第75页 |
| 5.2.2 试验数据的回归分析及验证实验 | 第75-77页 |
| 5.2.3 二因子交互作用 | 第77页 |
| 5.3 讨论 | 第77-79页 |
| 第六章 S.cerevisiae CWY132相关基因研究 | 第79-88页 |
| 6.1 材料与方法 | 第80-83页 |
| 6.1.1 材料 | 第80-81页 |
| 6.1.1.1 菌株 | 第80页 |
| 6.1.1.2 培养基 | 第80页 |
| 6.1.1.3 质粒和引物 | 第80页 |
| 6.1.1.4 主要试剂和仪器 | 第80-81页 |
| 6.1.2 方法 | 第81-83页 |
| 6.1.2.1 PCR合成ARO9基因敲除片段 | 第81-82页 |
| 6.1.2.2 PCR产物纯化 | 第82页 |
| 6.1.2.3 酵母高效转化 | 第82页 |
| 6.1.2.4 转化子鉴定 | 第82-83页 |
| 6.1.2.5 电泳分析 | 第83页 |
| 6.1.2.6 ARO9基因缺失酵母CWY132转化合成2-苯乙醇能力的考察 | 第83页 |
| 6.2 结果与分析 | 第83-86页 |
| 6.2.1 酵母ARO9基因的敲除 | 第83-84页 |
| 6.2.2 △aro9菌株的验证 | 第84-86页 |
| 6.2.3 ARO9基因缺失酵母CWY132转化合成2-苯乙醇能力的考察结果 | 第86页 |
| 6.3 讨论 | 第86-88页 |
| 参考文献 | 第88-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第96页 |
