| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 前言 | 第12-13页 |
| 文献综述 | 第13-31页 |
| 1 概述 | 第13-15页 |
| 1.1 阿特拉滓的施用现状 | 第13-14页 |
| 1.2 理化性质 | 第14-15页 |
| 1.3 阿特拉滓的生态毒理学 | 第15页 |
| 2 阿特拉津的危害 | 第15-16页 |
| 2.1 对农业生产的影响 | 第15页 |
| 2.2 对动植物的影响 | 第15-16页 |
| 2.3 对人类的影响 | 第16页 |
| 3 阿特拉津的生物降解 | 第16-17页 |
| 3.1 细菌 | 第16-17页 |
| 3.2 真菌 | 第17页 |
| 3.3 藻类 | 第17页 |
| 4 阿特拉津的微生物代谢途径 | 第17-19页 |
| 5 模式菌株Pseudomonas sp.ADP阿特拉津降解酶系和降解基因的研究 | 第19-22页 |
| 6 生物修复研究进展 | 第22-24页 |
| 7 芽孢杆菌表达系统概述 | 第24-26页 |
| 7.1 芽孢杆菌表达系统的特点 | 第24-25页 |
| 7.2 革兰氏染色与基因表达 | 第25-26页 |
| 7.3 关于表达酶的方面 | 第26页 |
| 参考文献 | 第26-31页 |
| 第一章 阿特拉津降解菌的分离与鉴定 | 第31-38页 |
| 1 材料与方法 | 第31-34页 |
| 1.1 菌株、试剂及污染土壤样品 | 第31-32页 |
| 1.2 阿特拉滓及其代谢产物的检测 | 第32页 |
| 1.3 菌种的纯化分离 | 第32页 |
| 1.4 降解菌的培养特征及生理生化鉴定 | 第32页 |
| 1.5 降解菌的16S rDNA序列的PCR扩增及测序 | 第32-33页 |
| 1.6 降解菌系统发育地位的确定与系统发育关系的研究 | 第33页 |
| 1.7 抗生素抗性试验 | 第33-34页 |
| 2 结果与分析 | 第34-36页 |
| 2.1 降解菌ADH-2的分离纯化 | 第34页 |
| 2.2 ADH-2的培养及生理生化鉴定结果 | 第34-35页 |
| 2.3 降解菌系统发育定位 | 第35-36页 |
| 2.4 ADH-2降解阿特拉津的产物 | 第36页 |
| 2.5 抗生素实验结果 | 第36页 |
| 3.本章小结 | 第36页 |
| 参考文献 | 第36-38页 |
| 第二章 降解菌生长和降解特性的研究 | 第38-44页 |
| 1.材料与方法 | 第38-39页 |
| 1.1 供试菌株 | 第38页 |
| 1.2 培养基 | 第38页 |
| 1.3 菌种制备及菌体生长量的测定方法 | 第38页 |
| 1.4 阿特拉津降解产物检测 | 第38页 |
| 1.5 降解菌碳源、氮源利用及最适碳氮比试验 | 第38-39页 |
| 1.6 降解菌利用阿特拉津生长情况试验 | 第39页 |
| 1.7 pH对菌株ADH-2降解阿特拉津的影响 | 第39页 |
| 1.8 通气量对菌株ADH-2降解阿特拉津的影响 | 第39页 |
| 2.结果与讨论 | 第39-43页 |
| 2.1 降解菌碳源、氮源谱及最适碳氮比 | 第39-41页 |
| 2.2 ADH-2的生长和阿特拉津降解的关系 | 第41-42页 |
| 2.3 pH值对降解菌生长和降解的影响 | 第42页 |
| 2.4 通气量对降解的影响 | 第42-43页 |
| 3 本章小结 | 第43-44页 |
| 第三章 降解菌ADH-2降解基因的克隆及其表达 | 第44-62页 |
| 第一节 降解菌ADH-2降解基因的克隆 | 第44-49页 |
| 1 材料与方法 | 第44-48页 |
| 1.1 菌株、质粒、酶及抗生素 | 第44-45页 |
| 1.2 养基 | 第45页 |
| 1.3 种培养条件 | 第45页 |
| 1.4 引物合成 | 第45-46页 |
| 1.5 细菌总DNA的小量提取见第一章 | 第46页 |
| 1.6 质粒DNA小量提取 | 第46页 |
| 1.7 大肠杆菌普通感受态细胞的制备及转化 | 第46-47页 |
| 1.8 PCR扩增反应体系 | 第47页 |
| 1.9 PCR产物T/A克隆与基因序列的测序 | 第47-48页 |
| 2 结果与分析 | 第48-49页 |
| 第二节 阿特拉津氯水解酶基因在大肠杆菌中的表达和酶活力检测 | 第49-53页 |
| 1 材料与方法 | 第49-51页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第49页 |
| 1.2 酶和引物 | 第49-50页 |
| 1.3 培养基 | 第50页 |
| 1.4 粒载体的线性化及目的基因的酶切 | 第50页 |
| 1.5 阿特拉津氯水解酶trzN的诱导表达 | 第50-51页 |
| 1.6 阿特拉津氯水解酶的活力测定 | 第51页 |
| 2 结果与讨论 | 第51-53页 |
| 2.1 trzN基因表达载体及菌株的构建 | 第51-52页 |
| 2.2 trzN基因在大肠杆菌表达系统中的表达 | 第52-53页 |
| 2.3 酶活力检测结果 | 第53页 |
| 3 本章小结 | 第53页 |
| 第三节 利用P43启动子和NprB信号肽编码序列构建高效分泌表达载体重组表达trzN基因 | 第53-60页 |
| 1 材料与方法 | 第53-56页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第53-54页 |
| 1.2 酶和引物 | 第54页 |
| 1.3 培养基 | 第54页 |
| 1.4 穿梭分泌表达载体pP43T的构建 | 第54页 |
| 1.5 枯草杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第54-55页 |
| 1.6 粗酶液的制备 | 第55页 |
| 1.7 酶活力检测 | 第55页 |
| 1.8 温度对酶促反应的影响 | 第55页 |
| 1.9 pH对酶促反应的影响 | 第55-56页 |
| 1.10 金属离子对酶促反应的影响 | 第56页 |
| 2 结果与分析 | 第56-59页 |
| 2.1 穿梭分泌表达载体pP43T的质粒电泳验证 | 第56页 |
| 2.2 表达蛋白的SDS-PAGE检测 | 第56-57页 |
| 2.3 酶活力检测 | 第57-58页 |
| 2.4 温度对酶促降解的影响 | 第58页 |
| 2.5 pH对酶促降解的影响 | 第58-59页 |
| 2.6 金属离子对酶活性的影响 | 第59页 |
| 3 讨论 | 第59-60页 |
| 4 本章小结 | 第60页 |
| 参考文献 | 第60-62页 |
| 第四章 菌株ADH-2在土壤中降解阿特拉津的效果和影响因素的研究 | 第62-69页 |
| 1.材料与方法 | 第62-63页 |
| 1.1 材料 | 第62页 |
| 1.2 方法 | 第62-63页 |
| 2.结果与分析 | 第63-66页 |
| 2.1 灭菌和未灭菌土壤中阿特拉津的降解 | 第63-64页 |
| 2.2 土壤pH值对降解的影响 | 第64-65页 |
| 2.3 降解菌接种量对降解效果的影响 | 第65页 |
| 2.4 土壤水分含量对降解效果的影响 | 第65-66页 |
| 3 讨论 | 第66页 |
| 4 本章小结 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-69页 |
| 全文总结 | 第69-71页 |
| 本文创新之处 | 第71-73页 |
| 附录1 文中所用缩写 | 第73-75页 |
| 附录2 实验用培养基及分子生物学试剂 | 第75-77页 |
| 附录3 枯草杆菌普通化学感受态细胞制备用试剂 | 第77-79页 |
| 附录4 相关DNA序列 | 第79-83页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第83-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
