| 摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 插图和附表清单 | 第18-21页 |
| 缩略词 | 第21-23页 |
| 第一章 绪言 | 第23-46页 |
| 1.1 赤霉素的特性及其作用 | 第23-26页 |
| 1.1.1 赤霉素的生物合成 | 第24-25页 |
| 1.1.2 赤霉素合成的调控因素 | 第25-26页 |
| 1.1.3 赤霉素合成关键酶基因GA20oxl | 第26页 |
| 1.2 甲醇和乙醇对植物生长的影响 | 第26-32页 |
| 1.2.1 外源甲醇对低等植物的生长的影响 | 第27-28页 |
| 1.2.2 外源甲醇对高等植物生长的影响 | 第28页 |
| 1.2.3 逆境胁迫下外源施用甲醇对植物的生长的影响 | 第28-29页 |
| 1.2.4 甲醇刺激植物生长机理的研究进展 | 第29-31页 |
| 1.2.4.1 影响植物激素生成假说 | 第29-30页 |
| 1.2.4.2 信号分子作用假说 | 第30页 |
| 1.2.4.3 碳源假说 | 第30页 |
| 1.2.4.4 提高植物光合作用假说 | 第30-31页 |
| 1.2.4.5 推动Ca~(2+)转移假说 | 第31页 |
| 1.2.5 乙醇刺激植物生长机理的研究进展 | 第31-32页 |
| 1.3 干旱胁迫对植物生长的研究进展 | 第32-34页 |
| 1.3.1 干旱胁迫对植物生长的影响 | 第32-34页 |
| 1.3.2 植物缓解干旱胁迫的机理 | 第34页 |
| 1.4 酸性土壤与铝毒 | 第34-35页 |
| 1.4.1 植物耐铝的生理机制 | 第35页 |
| 1.5 植物14-3-3蛋白的研究进展 | 第35-40页 |
| 1.5.1 植物14-3-3蛋白结构及其作用模式 | 第35-37页 |
| 1.5.2 植物14-3-3蛋白的功能 | 第37页 |
| 1.5.3 植物14-3-3蛋白参与基础代谢、抗逆性和转导等的调控 | 第37-40页 |
| 1.5.4 参与植物RSG细胞定位及RSG与GA20ox1的调节 | 第40页 |
| 1.6 RSG转录因子 | 第40-44页 |
| 1.6.1 RSG转录因子的作用机制 | 第41-42页 |
| 1.6.2 调节植物内源性赤霉素含量 | 第42-43页 |
| 1.6.3 RSG通过调控GAs含量从而调节植物形态建成 | 第43-44页 |
| 1.7 本研究的目的及其意义 | 第44-46页 |
| 第二章 甲醇和乙醇刺激对野生型烟草的生理特性变化及Nt14-3-3与NtRSG表达及互作分析 | 第46-66页 |
| 2.1 材料与方法 | 第47-57页 |
| 2.1.1 烟草切根及继代处理 | 第47页 |
| 2.1.2 载体和菌种 | 第47页 |
| 2.1.3 相关酶与试剂 | 第47-48页 |
| 2.1.4 烟草RNA粗提取和cDNA获取以及RT-PCR分析 | 第48-49页 |
| 2.1.5 Nt14-3-3a-1和NtRSG基因TA克隆 | 第49-50页 |
| 2.1.6 Nt14-3-3和NtRSG基因的原核表达载体构建及诱导表达 | 第50-51页 |
| 2.1.7 GST琼脂糖凝胶法分离并纯化GAT-14-3-3和GST-RSG重组融合蛋白 | 第51-52页 |
| 2.1.8 GST-RSG融合蛋白多克隆兔抗的制备及多抗分离获取 | 第52-53页 |
| 2.1.9 可溶性粗蛋白的提取 | 第53页 |
| 2.1.10 Western blot和Co-IP分析 | 第53页 |
| 2.1.11 染色质免疫共沉淀法(ChIP)分析烟草转录因子RSG与GA20ox1启动子结合水平 | 第53-55页 |
| 2.1.12 赤霉素含量测定 | 第55-56页 |
| 2.1.13 数据处理 | 第56-57页 |
| 2.2 结果与分析 | 第57-64页 |
| 2.2.1 Nt14-3-3a-1和NtRSG表达、纯化、抗体制备与鉴定 | 第57-58页 |
| 2.2.2 烟草NtGA200x1启动子序列分析 | 第58-59页 |
| 2.2.3 烟草应答甲醇和乙醇刺激的表型变化与GA相关性分析 | 第59-60页 |
| 2.2.4 甲醇和乙醇对野生型烟草赤霉素含量的影响 | 第60-61页 |
| 2.2.5 甲醇和乙醇对烟草14-3-3和RSG基因转录及表达水平的影响 | 第61-62页 |
| 2.2.6 甲醇和乙醇对RSG与GA20ox1启动子结合水平的影响 | 第62-63页 |
| 2.2.7 甲醇和乙醇对14-3-3蛋白与RSG互作水平的影响 | 第63-64页 |
| 2.3 讨论 | 第64-66页 |
| 第三章 甲醇和乙醇刺激对14-3-3和RSG转基因烟草的生理特性变化及14-3-3与RSG表达及互作分析 | 第66-80页 |
| 3.1 材料与方法 | 第66-70页 |
| 3.1.1 植物材料培养与处理 | 第66-67页 |
| 3.1.2 植物根伸长量和鲜重增加量测定 | 第67页 |
| 3.1.3 菌种及相关载体与材料 | 第67页 |
| 3.1.4 NtRSG入门克隆载体pENTR-2B-NtRSG和植物过表达载体pK2-35S-RSG和干扰载体pK7-35S-RSG-I-RSG的构建 | 第67-69页 |
| 3.1.5 农杆菌浸染烟草及转基因烟草的培养与筛选 | 第69页 |
| 3.1.6 过表达和抑制表达转基因烟草基因组插入和转录水平检测 | 第69-70页 |
| 3.1.7 过表达和抑制表达RSG转基因烟草RSG蛋白表达水平检测 | 第70页 |
| 3.1.8 Western blot和Co-IP分析 | 第70页 |
| 3.1.9 染色质免疫共沉淀法(ChIP)分析烟草转录因子RSG与GA20ox1启动子结合水平 | 第70页 |
| 3.1.10 赤霉素含量测定 | 第70页 |
| 3.1.11 数据处理 | 第70页 |
| 3.2 结果与分析 | 第70-78页 |
| 3.2.1 过表达和抑制表达RSG转基因烟草的获取与鉴定 | 第70-73页 |
| 3.2.2 过表达和抑制表达14-3-3和RSG烟草应答甲醇和乙醇刺激的表型变化及分析 | 第73-74页 |
| 3.2.3 甲醇和乙醇对转基因烟草赤霉素的影响 | 第74-75页 |
| 3.2.4 甲醇和乙醇对RSG与GA20ox1启动子结合水平的影响 | 第75-76页 |
| 3.2.5 甲醇和乙醇对RSG蛋白激酶CDPK表达水平的影响 | 第76-77页 |
| 3.2.6 甲醇和乙醇刺激对烟草Nt14-3-3和NtRSG互作水平的分析 | 第77-78页 |
| 3.3 讨论 | 第78-80页 |
| 第四章 干旱胁迫对野生型和转基因烟草的生理特性变化及Nt14-3-3与NtRSG表达及互作分析 | 第80-93页 |
| 4.1 材料与方法 | 第80-81页 |
| 4.1.1 植物材料培养 | 第80页 |
| 4.1.2 转基因烟草模拟干旱胁迫处理 | 第80-81页 |
| 4.1.3 失水率、叶片蒸腾速率、胞间CO2含量、净光合速率和气孔导度的测定 | 第81页 |
| 4.1.4 RT-PCR和Co-IP分析 | 第81页 |
| 4.1.5 染色质免疫共沉淀法分析 | 第81页 |
| 4.1.6 赤霉素含量的测定 | 第81页 |
| 4.1.7 数据处理 | 第81页 |
| 4.2 结果与分析 | 第81-91页 |
| 4.2.1 2%PEG模拟干旱胁迫对野生型烟草失水率和相关光合指标的影响 | 第81-82页 |
| 4.2.2 烟草应答2%PEG模拟干旱胁迫的生理变化与GA相关性分析 | 第82-83页 |
| 4.2.3 2%PEG模拟干旱胁迫下野生型烟草赤霉素含量的变化 | 第83-84页 |
| 4.2.4 外源添加GA和PAC对2%PEG模拟干旱胁迫下烟草RSG和CDPK转录水平分析 | 第84-85页 |
| 4.2.5 外源添加GA和PAC对2%PEG模拟干旱胁迫下野生型烟草14-3-3和RSG互作水平的分析 | 第85-86页 |
| 4.2.6 外源添加GA和PAC对2%PEG模拟干旱胁迫下RSG转基因烟草RSG与GA20ox1启动子序列结合分析 | 第86-87页 |
| 4.2.7 2%PEG模拟干旱胁迫下RSG转基因烟草失水率和相关光合指标的影响 | 第87-88页 |
| 4.2.8 2%PEG模拟干旱胁迫下RSG转基因烟草体内赤霉素含量的变化 | 第88-89页 |
| 4.2.9 2%PEG模拟干旱胁迫下RSG转基因烟草RSG与GA20ox1启动子序列结合分析 | 第89-90页 |
| 4.2.10 2%PEG模拟干旱胁迫下转基因烟草14-3-3和RSG表达水平的分析 | 第90-91页 |
| 4.3 讨论 | 第91-93页 |
| 第五章 铝胁迫对野生型和转基因烟草的生理特性变化及Nt14-3-3与NtRSG表达及互作分析 | 第93-102页 |
| 5.1 材料与方法 | 第93-95页 |
| 5.1.1 植物材料培养 | 第93-94页 |
| 5.1.2 烟草铝胁迫处理 | 第94页 |
| 5.1.3 根长和鲜重的测定 | 第94页 |
| 5.1.4 RT-PCR、Western blot和Co-IP分析 | 第94页 |
| 5.1.5 染色质免疫共沉淀法分析 | 第94页 |
| 5.1.6 赤霉素含量的测定 | 第94页 |
| 5.1.7 数据处理 | 第94-95页 |
| 5.2 结果与分析 | 第95-100页 |
| 5.2.1 铝胁迫下野生型烟草的根伸长与GA相关性分析 | 第95页 |
| 5.2.2 铝胁迫下野生型烟草赤霉素含量变化分析 | 第95-96页 |
| 5.2.3 铝胁迫下RSG转基因烟草RSG与GA20ox1启动子序列结合分析 | 第96-97页 |
| 5.2.4 铝胁迫下野生型烟草14-3-3、RSG和CDPK的转录和表达水平的分析 | 第97-98页 |
| 5.2.5 铝胁迫下野生型烟草14-3-3和RSG蛋白互作水平的分析 | 第98-99页 |
| 5.2.6 铝胁迫下RSG转基因烟草根伸长、RSG与GA20ox1启动子序列结合水平的分析 | 第99-100页 |
| 5.2.7 铝胁迫下RSG转基因烟草赤霉素含量的分析 | 第100页 |
| 5.3 讨论 | 第100-102页 |
| 第六章 总结与展望 | 第102-105页 |
| 6.1 总结 | 第102-103页 |
| 6.2 展望 | 第103-105页 |
| 致谢 | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-128页 |
| 附件A | 第128页 |
