| 摘要 | 第3-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 缩略词表 | 第10-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-26页 |
| 1 精原干细胞(spermatogonia stem cells,SSCs) | 第13-16页 |
| 1.1 精原干细胞的来源 | 第13-14页 |
| 1.2 精原干细胞的生物学特点 | 第14页 |
| 1.3 精原干细胞的分离与鉴定 | 第14-15页 |
| 1.4 调控精原干细胞形成的重要标记基因 | 第15-16页 |
| 2 诱导胚胎干细胞分化成雄性生殖细胞的方法 | 第16-17页 |
| 3 基因编辑技术的发展 | 第17-18页 |
| 4 研究目的与意义 | 第18-19页 |
| 5 参考文献 | 第19-26页 |
| 第二章 CPED1基因cDNA序列克隆与相关载体构建 | 第26-47页 |
| 1 材料与方法 | 第26-37页 |
| 1.1 实验材料与试剂 | 第26-27页 |
| 1.2 主要仪器和设备 | 第27页 |
| 1.3 主要试剂配制 | 第27页 |
| 1.4 引物设计与合成 | 第27-29页 |
| 1.4.1 CPED1基因克隆引物设计 | 第27-28页 |
| 1.4.2 CPED1基因靶位点设计 | 第28页 |
| 1.4.3 gRNA引物的设计 | 第28-29页 |
| 1.4.4 脱靶效率检测引物的设计 | 第29页 |
| 1.5 方法 | 第29-37页 |
| 1.5.1 鸡睾丸组织总RNA提取 | 第29-30页 |
| 1.5.2 反转录睾丸组织cDNA | 第30页 |
| 1.5.3 CPED1基因克隆 | 第30-31页 |
| 1.5.4 CPED1基因TA克隆测序及pcDNA3.0-CPED1载体构建 | 第31-33页 |
| 1.5.5 sgRNA重组质粒的构建 | 第33-35页 |
| 1.5.6 DF-1细胞培养与转染 | 第35页 |
| 1.5.7 流式细胞分选 | 第35页 |
| 1.5.8 DF-1细胞基因组DNA的提取 | 第35-36页 |
| 1.5.9 T7E1酶切试验 | 第36-37页 |
| 1.5.10 Luciferase-SSA报告载体活性检测 | 第37页 |
| 1.5.11 TA克隆测序分析 | 第37页 |
| 1.5.12 Cas9/gRNA敲除载体脱靶效率检测 | 第37页 |
| 2 结果 | 第37-43页 |
| 2.1 CPED1基因克隆与pcDNA3.0-CPED1载体的构建 | 第37-38页 |
| 2.2 CPED1敲除载体的构建 | 第38-39页 |
| 2.3 DF-1细胞的培养与转染条件的摸索 | 第39-40页 |
| 2.4 T7E1酶切检测 | 第40-41页 |
| 2.5 Luciferase-SSA活性检测 | 第41-42页 |
| 2.6 TA克隆测序 | 第42页 |
| 2.7 脱靶效率检测 | 第42-43页 |
| 3 讨论 | 第43-44页 |
| 4 小结 | 第44页 |
| 5 参考文献 | 第44-47页 |
| 第三章 CPED1基因调控鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化的研究 | 第47-63页 |
| 1 材料与方法 | 第47-52页 |
| 1.1 实验材料与试剂 | 第47-48页 |
| 1.2 主要仪器和设备 | 第48页 |
| 1.3 主要试剂配制 | 第48页 |
| 1.4 ESCs的分离培养及分组 | 第48-49页 |
| 1.5 鸡胚胎注射 | 第49页 |
| 1.6 鸡精原干细胞(SSCs)的分离培养 | 第49页 |
| 1.7 荧光定量PCR检测 | 第49-51页 |
| 1.8 间接免疫荧光检测 | 第51页 |
| 1.9 流式细胞分析 | 第51-52页 |
| 1.10 4.5d注射鸡胚石蜡切片及PAS染色 | 第52页 |
| 2 结果 | 第52-59页 |
| 2.1 体外检测CPED1促进ESCs的分化 | 第52-57页 |
| 2.1.1 细胞形态变化 | 第52-53页 |
| 2.1.2 荧光定量PCR检测 | 第53-55页 |
| 2.1.3 间接免疫荧光检测 | 第55-56页 |
| 2.1.4 流式细胞分析 | 第56-57页 |
| 2.2 体内检测CPED1促进鸡胚发育 | 第57-59页 |
| 2.2.1 4.5d鸡胚石蜡切片及PAS染色 | 第57-58页 |
| 2.2.2 荧光定量PCR检测 | 第58-59页 |
| 2.2.3 流式细胞分析检测 | 第59页 |
| 3 讨论 | 第59-60页 |
| 4 结论 | 第60-61页 |
| 5 参考文献 | 第61-63页 |
| 全文结论与创新 | 第63-64页 |
| 结论 | 第63页 |
| 创新点 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第65-66页 |
