| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-23页 |
| 1 影响花色形成的理化因子 | 第12-15页 |
| 1.1 色素分布 | 第13页 |
| 1.2 表皮细胞形状 | 第13页 |
| 1.3 液泡pH值 | 第13-14页 |
| 1.4 金属离子螯合作用 | 第14-15页 |
| 2 调控花色形成的关键基因 | 第15-17页 |
| 2.1 结构基因 | 第15-16页 |
| 2.2 调节基因 | 第16-17页 |
| 3 调控植物色泽形成的miRNA | 第17-21页 |
| 3.1 miRNA作用机理及特点 | 第17页 |
| 3.2 植物miRNA的研究方法及作用 | 第17-19页 |
| 3.3 调控植物色泽形成的miRNA研究进展 | 第19-21页 |
| 3.3.1 调控类黄酮代谢途径的miRNA | 第19-21页 |
| 3.3.2 调控其他其他色素合成的miRNA | 第21页 |
| 4 芍药花色形成研究进展 | 第21-22页 |
| 5 研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 第二章 不同色泽芍药花瓣的miRNA测序分析 | 第23-54页 |
| 1 材料与方法 | 第23-34页 |
| 1.1 材料 | 第23-25页 |
| 1.1.1 植物材料 | 第23-24页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第24页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第24-25页 |
| 1.2 方法 | 第25-34页 |
| 1.2.1 徒手切片与扫描电镜观察 | 第25-26页 |
| 1.2.2 细胞液pH值测定 | 第26页 |
| 1.2.3 有机酸含量测定 | 第26-27页 |
| 1.2.4 矿质元素含量测定 | 第27页 |
| 1.2.5 miRNA测序分析 | 第27-30页 |
| 1.2.6 miRNA前体序列亚克隆 | 第30-33页 |
| 1.2.7 miRNA表达水平检测 | 第33-34页 |
| 2 结果与分析 | 第34-52页 |
| 2.1 表皮形状 | 第34-36页 |
| 2.2 细胞液pH值 | 第36页 |
| 2.3 有机酸含量 | 第36-37页 |
| 2.4 矿质元素含量 | 第37页 |
| 2.5 miRNA测序结果 | 第37-52页 |
| 2.5.1 测序结果分析 | 第37-49页 |
| 2.5.2 测序结果准确性验证 | 第49-52页 |
| 3 讨论 | 第52-54页 |
| 第三章 调控芍药花瓣色泽形成的miRNA筛选 | 第54-77页 |
| 1 材料与方法 | 第54-62页 |
| 1.1 材料 | 第54-55页 |
| 1.1.1 植物材料 | 第54页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第54页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第54-55页 |
| 1.2 方法 | 第55-62页 |
| 1.2.1 一步法提取小RNA | 第55页 |
| 1.2.2 多步法提取小RNA | 第55页 |
| 1.2.3 改良多步法提取小RNA | 第55页 |
| 1.2.4 小分子RNA浓度和纯度检测 | 第55-56页 |
| 1.2.5 小分子RNA茎环法反转录 | 第56页 |
| 1.2.6 qRT-PCR | 第56-57页 |
| 1.2.7 miRNA前体序列的扩增 | 第57页 |
| 1.2.8 miRNA与转录组测序分析 | 第57页 |
| 1.2.9 miRNA及其靶基因的表达水平的检测 | 第57-58页 |
| 1.2.10 SPL基因克隆 | 第58-62页 |
| 2 结果与分析 | 第62-75页 |
| 2.1 miRNA提取方法比较 | 第62-66页 |
| 2.1.1 小RNA的浓度和纯度 | 第62-64页 |
| 2.1.2 qRT-PCR检测 | 第64-65页 |
| 2.1.3 前体序列的扩增 | 第65-66页 |
| 2.1.4 芍药花瓣提取miRNA方法综合比较 | 第66页 |
| 2.2 调控芍药花色形成的miRNA筛选 | 第66-75页 |
| 2.2.1 miRNA及其靶基因筛选 | 第66-67页 |
| 2.2.2 miRNA及其靶基因表达模式分析 | 第67-70页 |
| 2.2.3 PlSPL和PlSPL1基因cDNA克隆及序列分析 | 第70-75页 |
| 3 讨论 | 第75-77页 |
| 第四章 miR156e-3p对色泽调控作用的研究 | 第77-94页 |
| 1 材料与方法 | 第77-85页 |
| 1.1 材料 | 第77-78页 |
| 1.1.1 实验材料 | 第77页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第77-78页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第78页 |
| 1.2 方法 | 第78-85页 |
| 1.2.1 总RNA的提取 | 第78页 |
| 1.2.2 cDNA第一链的合成 | 第78页 |
| 1.2.3 目的基因的获取 | 第78页 |
| 1.2.4 含酶切位点的目的基因获取 | 第78-79页 |
| 1.2.5 酶切 | 第79页 |
| 1.2.6 目的片段与表达载体的连接 | 第79-80页 |
| 1.2.7 连接产物转化大肠杆菌 | 第80页 |
| 1.2.8 重组菌液PCR验证 | 第80页 |
| 1.2.9 重组质粒的双酶切 | 第80-81页 |
| 1.2.10 重组质粒导入农杆菌及筛选鉴定 | 第81页 |
| 1.2.11 农杆菌侵染液的制备 | 第81-82页 |
| 1.2.12 拟南芥遗传转化 | 第82-83页 |
| 1.2.13 转基因植株的检测 | 第83-85页 |
| 2 结果与分析 | 第85-92页 |
| 2.1 目的基因载体构建 | 第85-88页 |
| 2.1.1 目的基因的获取 | 第85-86页 |
| 2.1.2 重组菌液PCR验证 | 第86-87页 |
| 2.1.3 重组质粒双酶切验证 | 第87-88页 |
| 2.2 重组质粒转化农杆菌PCR验证 | 第88页 |
| 2.3 拟南芥阳性转化植株筛选、鉴定及表型观察 | 第88-92页 |
| 2.3.1 转化植株培养基筛选及GUS染色鉴定 | 第88-89页 |
| 2.3.2 GUS区PCR检测 | 第89-90页 |
| 2.3.3 转基因植株表型观察 | 第90页 |
| 2.3.4 miR156e-3p及其靶基因的qRT-PCR检测 | 第90-91页 |
| 2.3.5 类黄酮含量测定 | 第91-92页 |
| 3 讨论 | 第92-94页 |
| 参考文献 | 第94-108页 |
| 附表 | 第108-118页 |
| 致谢 | 第118-120页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第120-121页 |