| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-17页 |
| 1 玫瑰概述 | 第11-12页 |
| 1.1 玫瑰的价值 | 第11页 |
| 1.2 玫瑰主要芳香成分 | 第11-12页 |
| 2 植物花香代谢研究进展 | 第12-14页 |
| 2.1 植物花香代谢途径 | 第12-13页 |
| 2.1.1 萜类化合物的生物合成 | 第12-13页 |
| 2.1.2 苯类/苯丙素类化合物的生物合成 | 第13页 |
| 2.1.3 脂肪酸化合物合成途径 | 第13页 |
| 2.2 植物花香生物合成关键酶和基因 | 第13-14页 |
| 3 植物次生代谢产物的转录调控 | 第14-16页 |
| 3.1 转录因子概述 | 第14-15页 |
| 3.2 MYB转录因子研究现状 | 第15-16页 |
| 4 本研究的目的及意义 | 第16-17页 |
| 第二章 玫瑰RrNUDX1基因的克隆与表达分析 | 第17-30页 |
| 1 材料与方法 | 第17-19页 |
| 1.1 植物材料 | 第17-18页 |
| 1.2 生化试剂 | 第18页 |
| 1.3 主要仪器 | 第18-19页 |
| 1.4 常用试剂的配制 | 第19页 |
| 2 试验方法 | 第19-24页 |
| 2.1 玫瑰总RNA的提取 | 第19页 |
| 2.2 玫瑰RrNUDX1基因cDNA全长的克隆 | 第19-22页 |
| 2.3 玫瑰RrNUDX1基因的时空表达分析 | 第22-24页 |
| 3 芳香成分分析 | 第24页 |
| 3.1 HS-SPME取样 | 第24页 |
| 3.2 GC-MS分析 | 第24页 |
| 3.3 定性和定量分析 | 第24页 |
| 4 结果与分析 | 第24-28页 |
| 4.1 玫瑰RrNUDX1基因cDNA序列的克隆及序列分析 | 第24-26页 |
| 4.2 玫瑰RrNUDX1基因的时空表达分析 | 第26-27页 |
| 4.3 主要单萜类花香成分的积累 | 第27-28页 |
| 5 讨论 | 第28-30页 |
| 第三章 玫瑰花瓣酵母单杂文库的构建 | 第30-39页 |
| 1 材料 | 第30页 |
| 2 试验方法 | 第30-36页 |
| 2.1 玫瑰总RNA的提取 | 第30页 |
| 2.2 mRNA的分离 | 第30-31页 |
| 2.3 '唐红'cDNA初级文库的构建 | 第31-35页 |
| 2.3.1 cDNA第一链的合成 | 第31页 |
| 2.3.2 cDNA第二链的合成 | 第31-32页 |
| 2.3.3 cDNA与三框attB1重组接头连接 | 第32页 |
| 2.3.4 cDNA分级分离及收集 | 第32-33页 |
| 2.3.5 BP重组反应 | 第33页 |
| 2.3.6 电转化大肠杆菌DH10B | 第33-34页 |
| 2.3.7 cDNA初级文库文库质量鉴定 | 第34-35页 |
| 2.4 '唐红'pGADT7酵母单杂交文库的构建 | 第35-36页 |
| 2.4.1 初级文库的质粒抽提 | 第35页 |
| 2.4.2 文库质粒重组 | 第35页 |
| 2.4.3 酵母文库的质粒提取 | 第35页 |
| 2.4.4 酵母文库质粒转化到AH109酵母细胞 | 第35页 |
| 2.4.5 酵母文库质量鉴定 | 第35-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-38页 |
| 3.1 玫瑰花瓣总RNA提取 | 第36页 |
| 3.2 mRNA的分离 | 第36-37页 |
| 3.3 初级文库库容量鉴定 | 第37-38页 |
| 4 讨论 | 第38-39页 |
| 第四章 RrNUDX1和RrDXR基因启动子克隆与酵母单杂交互作筛选 | 第39-55页 |
| 1 材料 | 第39页 |
| 2 试验方法 | 第39-45页 |
| 2.1 玫瑰总DNA的提取 | 第39页 |
| 2.2 染色体步移 | 第39-41页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第39-40页 |
| 2.2.2 限制性酶切及连接 | 第40页 |
| 2.2.3 反应体系和条件 | 第40-41页 |
| 2.2.4 PCR电泳与回收 | 第41页 |
| 2.3 PCR纯化产物连接到pMD18-T载体 | 第41-42页 |
| 2.4 连接产物转化 | 第42页 |
| 2.5 菌落PCR及测序 | 第42页 |
| 2.6 PCR产物克隆测序 | 第42页 |
| 2.7 启动子元件预测 | 第42-43页 |
| 2.8 候选片段酵母单杂交互作筛选 | 第43-45页 |
| 2.8.1 pGADT7-REC2-RrNUDX1和pGADT7-REC2-RrDXR载体的构建 | 第43页 |
| 2.8.2 候选片段载体构建 | 第43-44页 |
| 2.8.3 诱饵载体和目标载体的共转化 | 第44页 |
| 2.8.4 酵母单杂筛选第二种体系 | 第44-45页 |
| 3 结果与讨论 | 第45-53页 |
| 3.1 RrNUDX1启动子的克隆及元件预测分析 | 第45-47页 |
| 3.2 RrDXR启动子的克隆及元件预测分析 | 第47-51页 |
| 3.3 RrNUDX1同DNA片段N1及N2的互作情况 | 第51-52页 |
| 3.4 RrDXR同DNA片段D1及D2,D3的互作情况 | 第52页 |
| 3.5 RrNUDX1同DNA片段N2的互作情况 | 第52-53页 |
| 3.6 RrDXR同DNA片段D1的互作情况 | 第53页 |
| 4 讨论 | 第53-55页 |
| 第五章 玫瑰RrNUDX1、RrDXR基因转化矮牵牛与功能验证 | 第55-73页 |
| 1 材料 | 第55-56页 |
| 1.1 试验材料 | 第55-56页 |
| 1.1.1 植物材料 | 第55页 |
| 1.1.2 载体质粒与菌株 | 第55页 |
| 1.1.3 主要试剂的配制 | 第55-56页 |
| 1.1.4 矮牵牛遗传转化基本培养基 | 第56页 |
| 2 试验方法 | 第56-62页 |
| 2.1 RrNUDX1基因过表达载体构建 | 第56-59页 |
| 2.1.1 玫瑰花瓣总RNA提取 | 第56页 |
| 2.1.2 反转录cDNA第一链合成 | 第56页 |
| 2.1.3 目的基因的初步获取 | 第56-57页 |
| 2.1.4 目的基因(含有酶切位点)的获取 | 第57-59页 |
| 2.1.5 重组质粒的鉴定及检测 | 第59页 |
| 2.1.6 重组质粒导入农杆菌EHA105及筛选鉴定 | 第59页 |
| 2.2 矮牵牛遗传转化体系优化 | 第59-61页 |
| 2.2.1 植物材料的获得 | 第59-60页 |
| 2.2.2 矮牵牛遗传转化体系选择压和抑菌剂浓度的确定 | 第60页 |
| 2.2.3 农杆菌侵染液的培养 | 第60页 |
| 2.2.4 矮牵牛的遗传转化 | 第60-61页 |
| 2.3 转基因矮牵牛的检测 | 第61-62页 |
| 2.3.1 矮牵牛愈伤GUS染色 | 第61页 |
| 2.3.2 PCR检测 | 第61页 |
| 2.3.3 矮牵牛转基因植株表型观察 | 第61页 |
| 2.3.4 RrNUDX1和RrDXR基因在矮牵牛中的表达分析 | 第61-62页 |
| 2.3.5 转基因植株挥发性成分检测 | 第62页 |
| 3结果与分析 | 第62-71页 |
| 3.1 基因过表达载体构建 | 第62-65页 |
| 3.1.1 RrNUDX1基因的克隆与序列分析 | 第62-63页 |
| 3.1.2 RrNUDX1重组质粒的酶切验证及测序分析 | 第63-64页 |
| 3.1.3 pCAMBIA1304-RrNUDX1重组质粒转化农杆菌 | 第64-65页 |
| 3.2 矮牵牛遗传转化体系优化 | 第65-66页 |
| 3.2.1 潮霉素选择压力的确定 | 第65页 |
| 3.2.2 抑菌剂羧苄(Cb)浓度的确定 | 第65-66页 |
| 3.3 转基因矮牵牛的分子检测 | 第66-71页 |
| 3.3.1 矮牵牛愈伤组织GUS染色 | 第66页 |
| 3.3.2 转基因植株PCR检测 | 第66-67页 |
| 3.3.3 转基因植株表型观测 | 第67-69页 |
| 3.3.4 玫瑰RrNUDX1和RrDXR基因在矮牵牛中的表达分析 | 第69-70页 |
| 3.3.5 野生型和转基因矮牵牛植株挥发性成分分析 | 第70-71页 |
| 4 讨论 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-80页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
