| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 缩略语表（Abbreviation） | 第12-13页 |
| 1.前言 | 第13-24页 |
| 1.1 日本乙型脑炎简述 | 第13页 |
| 1.2 日本乙型脑炎的流行病学特征 | 第13-15页 |
| 1.2.1 日本乙型脑炎传播的范围 | 第13-14页 |
| 1.2.2 日本乙型脑炎传播的特点 | 第14-15页 |
| 1.3 日本乙型脑炎的病原学特征 | 第15-18页 |
| 1.3.1 日本乙型脑炎病毒的基因组结构 | 第15-16页 |
| 1.3.2 日本乙型脑炎病毒的蛋白及其功能 | 第16-17页 |
| 1.3.3 日本乙型脑炎病毒的入侵及复制 | 第17-18页 |
| 1.4 日本乙型脑炎的临床症状及病理变化 | 第18-19页 |
| 1.4.1 日本乙型脑炎的临床症状 | 第18-19页 |
| 1.4.2 日本乙型脑炎的病理变化 | 第19页 |
| 1.5 日本乙型脑炎的防控措施 | 第19-21页 |
| 1.5.1 免疫接种 | 第19-20页 |
| 1.5.2 杜绝传播媒介 | 第20页 |
| 1.5.3 宿主动物管理 | 第20-21页 |
| 1.6 黄病毒NS3解旋酶的研究进展 | 第21-22页 |
| 1.6.1 黄病毒NS3解旋酶结构和功能的研究进展 | 第21页 |
| 1.6.2 黄病毒NS3解旋酶抑制剂的研究进展 | 第21-22页 |
| 1.7 黄病毒NS4B蛋白的研究进展 | 第22-24页 |
| 2.研究目的和意义 | 第24-25页 |
| 3.材料与方法 | 第25-44页 |
| 3.1 实验材料 | 第25-32页 |
| 3.1.1 毒株与细胞 | 第25页 |
| 3.1.2 菌种与质粒 | 第25-28页 |
| 3.1.3 引物设计 | 第28页 |
| 3.1.4 主要药品及试剂 | 第28-29页 |
| 3.1.5 主要培养基及相关溶液 | 第29-30页 |
| 3.1.6 缓冲液 | 第30-31页 |
| 3.1.6.1 50×TAE缓冲液 | 第30页 |
| 3.1.6.2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）缓冲液 | 第30页 |
| 3.1.6.3 蛋白纯化缓冲液 | 第30-31页 |
| 3.1.6.4 Western-blot缓冲液的配制 | 第31页 |
| 3.1.7 其他相关缓冲液及抗生素 | 第31-32页 |
| 3.2 实验方法 | 第32-44页 |
| 3.2.1 质粒构建 | 第32-36页 |
| 3.2.1.1 目的基因的扩增 | 第32页 |
| 3.2.1.2 目的片段的回收 | 第32-33页 |
| 3.2.1.3 目的片段的连接 | 第33页 |
| 3.2.1.4 连接产物的转化 | 第33页 |
| 3.2.1.5 质粒的少量提取与酶切鉴定 | 第33-35页 |
| 3.2.1.6 表达质粒的构建与鉴定 | 第35-36页 |
| 3.2.2 重组菌的表达与鉴定 | 第36-40页 |
| 3.2.2.1 重组表达菌株的构建 | 第36页 |
| 3.2.2.2 重组蛋白在E.Coli中的可溶性表达 | 第36-37页 |
| 3.2.2.3 SDS-PAGE检测 | 第37页 |
| 3.2.2.4 Western blot鉴定 | 第37-38页 |
| 3.2.2.5 重组蛋白的大量表达 | 第38页 |
| 3.2.2.6 可溶性蛋白的纯化及鉴定 | 第38-39页 |
| 3.2.2.7 BCA法测定蛋白浓度 | 第39-40页 |
| 3.2.3 细胞的复苏、传代、冻存 | 第40页 |
| 3.2.3.1 细胞的复苏 | 第40页 |
| 3.2.3.2 细胞的传代 | 第40页 |
| 3.2.3.3 细胞的冻存 | 第40页 |
| 3.2.4 重组质粒的真核表达分析 | 第40-41页 |
| 3.2.4.1 脂质体介导的转化法 | 第40-41页 |
| 3.2.4.2 间接免疫荧光（IFA） | 第41页 |
| 3.2.5 免疫共沉淀实验验证蛋白的相互作用 | 第41-42页 |
| 3.2.6 GST-pull down实验 | 第42页 |
| 3.2.7 病毒滴度测定 | 第42-44页 |
| 3.2.7.1 空斑样品的制备 | 第42-43页 |
| 3.2.7.2 空斑实验 | 第43-44页 |
| 4.实验结果与分析 | 第44-58页 |
| 4.1 NS4B与NS3解旋酶的相互作用 | 第44-47页 |
| 4.1.1 NS4B基因与NS3解旋酶基因的扩增 | 第44页 |
| 4.1.2 真核重组质粒的酶切鉴定 | 第44-45页 |
| 4.1.3 NS4B与NS3解旋酶的真核表达分析 | 第45-46页 |
| 4.1.4 免疫共沉淀实验验证NS4B与NS3解旋酶的相互作用 | 第46-47页 |
| 4.2 JEV NS4B拓扑结构的鉴定 | 第47-50页 |
| 4.2.1 JEV NS4B跨膜区的预测分析 | 第47-48页 |
| 4.2.2 JEV NS4B膜拓扑结构的鉴定 | 第48-50页 |
| 4.3 NS4B膜外区与NS3解旋酶的相互作用 | 第50-57页 |
| 4.3.1 免疫共沉淀实验验证NS4B膜外区与NS3解旋酶的相互作用 | 第50-52页 |
| 4.3.1.1 真核质粒的表达分析 | 第50-51页 |
| 4.3.1.2 免疫共沉淀实验验证NS4B膜外区与NS3解旋酶的相互作用 | 第51-52页 |
| 4.3.2 GST pull down验证NS4B膜外区与NS3解旋酶的相互作用 | 第52-57页 |
| 4.3.2.1 原核表达质粒的构建 | 第52-53页 |
| 4.3.2.2 NS4B膜外区蛋白的原核表达及Western blot鉴定 | 第53-54页 |
| 4.3.2.3 NS4B膜外区蛋白的纯化 | 第54-55页 |
| 4.3.2.4 NS3解旋酶的纯化 | 第55-56页 |
| 4.3.2.5 GST蛋白的纯化及Western blot鉴定 | 第56页 |
| 4.3.2.6 GST pull down验证NS4B膜外区与NS3解旋酶的相互作用 | 第56-57页 |
| 4.4 NS4B膜外区对病毒复制的影响 | 第57-58页 |
| 5.讨论与结论 | 第58-61页 |
| 5.1 讨论 | 第58-60页 |
| 5.1.1 NS3解旋酶与NS4B的相互作用 | 第58页 |
| 5.1.2 NS4B的亚细胞定位 | 第58-59页 |
| 5.1.3 NS4B膜外区与NS3解旋酶的互作 | 第59页 |
| 5.1.4 过表达NS4B及其膜外区对病毒复制的影响 | 第59-60页 |
| 5.2 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
