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鸭坦布苏病毒E蛋白中和表位的鉴定和受体的筛选

摘要第6-8页
Abstract第8-10页
缩略词表(Abbreviation)第11-13页
1 文献综述第13-18页
    1.1 单克隆抗体概述第13页
        1.1.1 表位的分类与分析方法第13页
        1.1.2 单链抗体的研究进展第13页
    1.2 病毒受体概述第13-14页
        1.2.1 病毒与受体的结合第13-14页
        1.2.2 病毒受体的研究方法第14页
    1.3 鸭坦布苏病毒(DTMUV)简介第14-17页
        1.3.1 DTMUV的流行病学第14-15页
        1.3.2 DTMUV分子生物学特征第15-16页
        1.3.3 DTMUV E蛋白简介第16-17页
    1.4 DTMUV及其他黄病毒受体的研究现状第17-18页
2 目的与意义第18-19页
3 材料与方法第19-37页
    3.1 实验材料第19-24页
        3.1.1 细菌、细胞、毒株和实验动物第19页
        3.1.2 质粒与载体第19页
        3.1.3 引物序列第19-21页
        3.1.4 工具酶及主要试剂第21-22页
        3.1.5 培养基和抗生素的配制第22-24页
        3.1.6 主要实验仪器及设备第24页
        3.1.7 分子生物学分析软件第24页
    3.2 实验方法第24-37页
        3.2.1 细胞、病毒样品的总RNA的提取和cDNA的合成第24-25页
        3.2.2 目的基因的PCR扩增第25页
        3.2.3 PCR产物或酶切产物回收与纯化第25页
        3.2.4 外源DNA片段与质粒载体的连接反应第25-26页
        3.2.5 大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法)第26页
        3.2.6 质粒的制备与鉴定第26-27页
        3.2.7 质粒转染第27-28页
        3.2.8 免疫印迹法(Western Blot)检测分析第28-29页
        3.2.9 原核蛋白诱导表达与纯化第29-30页
        3.2.10 DTMUV-E单克隆抗体的制备与鉴定第30-34页
        3.2.11 DTMUV-E单克隆抗体抗原表位的鉴定第34页
        3.2.12 真核蛋白表达与纯化第34-35页
        3.2.13 细胞受体的筛选第35-36页
        3.2.14 统计学方法第36-37页
4 结果与分析第37-56页
    4.1 DTMUV E单克隆抗体的制备与鉴定第37-43页
        4.1.1 截短E基因序列比对分析第37-38页
        4.1.2 E蛋白原核重组载体的构建表达与纯化第38-39页
        4.1.3 E蛋白单克隆抗体的制备与鉴定第39-42页
        4.1.4 中和抗体的筛选第42-43页
    4.2 E蛋白中和表位的鉴定第43-48页
        4.2.1 单克隆抗体结合E蛋白结构域的筛选第43-45页
        4.2.2 3B8G单克隆抗体抗原表位的鉴定第45-48页
        4.2.3 3B8G单克隆抗体交叉结合反应分析第48页
    4.3 抗DTMUV E蛋白ScFv的制备与鉴定第48-51页
        4.3.1 单克隆抗体 κ 轻链可变区的序列测定与分析第48-49页
        4.3.2 抗DTMUV E蛋白ScFv的制备与鉴定第49-51页
    4.4 DTMUV E蛋白受体的筛选第51-56页
        4.4.1 EDIII蛋白真核分泌表达与纯化第51-52页
        4.4.2 E蛋白及其截短蛋白结合DTMUV易感细胞的分析第52-53页
        4.4.3 VOPBA筛选DTMUV受体第53-54页
        4.4.4 Co-IP筛选DTMUV受体第54-55页
        4.4.5 DTMUV E蛋白的血凝试验第55-56页
5 讨论第56-59页
    5.1 DTMUV E蛋白单克隆抗体的制备与鉴定第56页
    5.2 DTMUV E蛋白中和抗原表位的鉴定第56-57页
    5.3 抗DTMUV E蛋白ScFv的制备与鉴定第57页
    5.4 DTMUV E蛋白受体的筛选第57-59页
6 结论第59-60页
参考文献第60-66页
研究生期间发表的论文第66-67页
致谢第67页

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