| 中文摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 第一章 前言 | 第17-39页 |
| 1.1 手足口病介绍 | 第17-28页 |
| 1.1.1 手足口病概述 | 第17-18页 |
| 1.1.2 引起手足口病病毒分型 | 第18-19页 |
| 1.1.3 EV71和CVA16病毒结构与功能 | 第19-20页 |
| 1.1.4 EV71和CVA16病毒感染机制 | 第20-22页 |
| 1.1.5 EV71和CVA16分子流行病学 | 第22-28页 |
| 1.2 手足口病的治疗与预防 | 第28-32页 |
| 1.2.1 手足口病的治疗 | 第28页 |
| 1.2.2 手足口病预防性疫苗 | 第28-32页 |
| 1.3 手足口病疫苗表达策略 | 第32-36页 |
| 1.3.1 病毒样颗粒疫苗表达系统的选择 | 第32-33页 |
| 1.3.2 昆虫细胞杆状病毒表达系统在疫苗中的应用 | 第33-34页 |
| 1.3.3 昆虫细胞杆状病毒表达系统 | 第34-36页 |
| 1.4 本论文的立题依据和实验设计 | 第36-39页 |
| 第二章 亚单位蛋白VP1多克隆抗体的制备 | 第39-49页 |
| 2.1 实验材料 | 第39-41页 |
| 2.1.1 质粒、菌株 | 第39页 |
| 2.1.2 主要试剂和仪器 | 第39页 |
| 2.1.3 主要溶液配制 | 第39-40页 |
| 2.1.4 相关引物合成 | 第40-41页 |
| 2.2 实验方法 | 第41-45页 |
| 2.2.1 大肠杆菌克隆菌株感受态的制备 | 第41页 |
| 2.2.2 大肠杆菌表达菌株感受态的制备 | 第41页 |
| 2.2.3 质粒的扩增 | 第41-42页 |
| 2.2.4 PCR获得VP1亚单位蛋白基因序列 | 第42-43页 |
| 2.2.5 VP1基因序列的构建 | 第43页 |
| 2.2.6 VP1亚单位蛋白的筛选表达 | 第43页 |
| 2.2.7 VP1亚单位蛋白的纯化 | 第43-44页 |
| 2.2.8 VP1亚单位蛋白的复性 | 第44页 |
| 2.2.9 VP1亚单位蛋白多克隆血清制备 | 第44-45页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第45-47页 |
| 2.3.1 VP1亚单位蛋白基因序列的扩增和验证 | 第45页 |
| 2.3.2 VP1亚单位蛋白原核系统表达筛选 | 第45-46页 |
| 2.3.3 VP1亚单位蛋白原核系统表达纯化和鉴定 | 第46页 |
| 2.3.4 VP1亚单位蛋白多克隆抗体鉴定 | 第46-47页 |
| 2.4 小结 | 第47-49页 |
| 第三章 VLPs疫苗和灭活疫苗的表达与纯化 | 第49-63页 |
| 3.1 实验材料 | 第49-51页 |
| 3.1.1 质粒、菌株、病毒株和细胞株 | 第49页 |
| 3.1.2 主要试剂和仪器 | 第49-50页 |
| 3.1.3 主要溶液配制 | 第50页 |
| 3.1.4 相关引物合成 | 第50-51页 |
| 3.2 实验方法 | 第51-56页 |
| 3.2.1 PCR获得目的基因 | 第51-52页 |
| 3.2.2 目的基因分别构建到pFastBac?Dual载体 | 第52-53页 |
| 3.2.3 目的基因分别构建到穿梭载体 | 第53-54页 |
| 3.2.4 Bacmid转染昆虫细胞Sf9 | 第54页 |
| 3.2.5 杆状病毒的扩增和相应杆状病毒滴度测定 | 第54-55页 |
| 3.2.6 VLPs疫苗的表达和纯化 | 第55-56页 |
| 3.2.7 病毒的表达、纯化和灭活疫苗的制备 | 第56页 |
| 3.2.8 透射电镜观察 | 第56页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第56-61页 |
| 3.3.1 目的基因序列构建到pFastBac?Dual载体 | 第56-57页 |
| 3.3.2 重组杆粒（Bacmid）的鉴定 | 第57-58页 |
| 3.3.3 Bacmid转染和杆状病毒的测定 | 第58-59页 |
| 3.3.4 VLPs疫苗和灭活疫苗的SDS-PAGE、Western-Blotting鉴定 | 第59-60页 |
| 3.3.5 VLPs疫苗和灭活疫苗的电镜观察 | 第60-61页 |
| 3.4 小结 | 第61-63页 |
| 第四章 VLPs疫苗和灭活疫苗的免疫原性研究 | 第63-85页 |
| 4.1 实验材料 | 第63-64页 |
| 4.1.1 质粒、病毒株和细胞株 | 第63页 |
| 4.1.2 主要试剂和仪器 | 第63页 |
| 4.1.3 主要试剂配制 | 第63-64页 |
| 4.1.4 相关引物的设计 | 第64页 |
| 4.1.5 实验动物 | 第64页 |
| 4.2 实验方法 | 第64-70页 |
| 4.2.1 攻毒株的扩增和TCID50测定 | 第64-65页 |
| 4.2.2 病毒株攻击1日龄ICR乳鼠 | 第65页 |
| 4.2.3 乳鼠的组织分离和病毒载量的测定 | 第65-66页 |
| 4.2.4 假病毒制备和假病毒滴度的测定 | 第66页 |
| 4.2.5 单价疫苗和联合疫苗ICR小鼠免疫实验 | 第66-67页 |
| 4.2.6 单价疫苗和联合疫苗假病毒中和抗体趋势检测 | 第67-68页 |
| 4.2.7 单价疫苗和联合疫苗广谱性中和抗体检测 | 第68页 |
| 4.2.8 单价疫苗和联合疫苗IgG抗体趋势检测 | 第68-69页 |
| 4.2.9 单价疫苗和联合疫苗ICR乳鼠保护力实验 | 第69-70页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第70-83页 |
| 4.3.1 乳鼠模型攻毒剂量和LD50的计算 | 第70-72页 |
| 4.3.2 乳鼠模型组织病毒载量的测定 | 第72-73页 |
| 4.3.3 单价疫苗和联合疫苗假病毒中和抗体趋势测定 | 第73-75页 |
| 4.3.4 单价疫苗和联合疫苗广谱性中和抗体测定 | 第75-77页 |
| 4.3.5 单价疫苗和联合疫苗IgG抗体趋势测定 | 第77-79页 |
| 4.3.6 单价疫苗和联合疫苗乳鼠保护力评定 | 第79-83页 |
| 4.4 小结 | 第83-85页 |
| 第五章 EV71 VLPs疫苗抗原和抗体ED_(50)研究 | 第85-101页 |
| 5.1 实验材料 | 第85-86页 |
| 5.1.1 病毒株和细胞株 | 第85页 |
| 5.1.2 主要试剂和仪器 | 第85页 |
| 5.1.3 主要试剂配制 | 第85-86页 |
| 5.2 实验方法 | 第86-90页 |
| 5.2.1 EV71 VLPs的层析制备 | 第86-87页 |
| 5.2.2 EV71 VLPs纯度和形态学特征验证 | 第87页 |
| 5.2.3 EV71 VLPs蛋白含量的检测 | 第87页 |
| 5.2.4 EV71 VLPs不同免疫剂量在ICR鼠中免疫原性的评价 | 第87-88页 |
| 5.2.5 EV71 VLPs不同免疫剂量中和抗体检测 | 第88-89页 |
| 5.2.6 EV71 VLPs不同免疫剂量的IgG滴度检测 | 第89页 |
| 5.2.7 EV71 VLPs抗原ED_(50)实验 | 第89页 |
| 5.2.8 EV71 VLPs抗体ED_(50)实验 | 第89-90页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第90-99页 |
| 5.3.1 EV71 VLPs的层析纯化和形态学验证 | 第90-93页 |
| 5.3.2 EV71 VLPs蛋白含量的测定 | 第93页 |
| 5.3.3 EV71 VLPs不同免疫剂量中和抗体检测 | 第93-94页 |
| 5.3.4 EV71 VLPs不同免疫剂量的IgG滴度检测 | 第94-95页 |
| 5.3.5 EV71 VLPs抗原ED_(50)评定 | 第95-96页 |
| 5.3.6 EV71 VLPs抗体ED_(50)评定 | 第96-99页 |
| 5.4 小结 | 第99-101页 |
| 讨论 | 第101-105页 |
| 结论 | 第105-107页 |
| 参考文献 | 第107-119页 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 | 第119-122页 |
| 致谢 | 第122页 |
