| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略词 | 第13-15页 |
| 第1章 绪论 | 第15-29页 |
| 1.1 表观遗传学与组蛋白修饰 | 第15-19页 |
| 1.1.1 表观遗传学概述 | 第15-17页 |
| 1.1.2 组蛋白修饰 | 第17-19页 |
| 1.2 组蛋白乙酰转移酶hMOF与组蛋白H4K16ac | 第19-24页 |
| 1.2.1 组蛋白乙酰转移酶hMOF | 第19-21页 |
| 1.2.2 组蛋白去乙酰转移酶HDACs | 第21-22页 |
| 1.2.3 组蛋白H4K16ac | 第22-24页 |
| 1.3 三氧化二砷概述 | 第24-27页 |
| 1.3.1 三氧化二砷的危害及应用 | 第24-25页 |
| 1.3.2 三氧化二砷的作用机制 | 第25-26页 |
| 1.3.3 三氧化二砷与表观遗传修饰 | 第26-27页 |
| 1.4 立题依据与研究意义 | 第27-29页 |
| 1.4.1 立题依据 | 第27页 |
| 1.4.2 研究意义 | 第27-29页 |
| 第2章 三氧化二砷对组蛋白H4乙酰化修饰及hMOF表达和转录水平的调控作用 | 第29-43页 |
| 2.1 引言 | 第29-30页 |
| 2.2 材料与仪器 | 第30-32页 |
| 2.2.1 细胞 | 第30页 |
| 2.2.2 抗体 | 第30页 |
| 2.2.3 RT‐PCR引物 | 第30页 |
| 2.2.4 实验试剂 | 第30-31页 |
| 2.2.5 实验仪器 | 第31-32页 |
| 2.3 试验方法 | 第32-36页 |
| 2.3.1 三氧化二砷（As2O3）储液的配制 | 第32页 |
| 2.3.2 细胞培养与三氧化二砷处理 | 第32页 |
| 2.3.3 Western blot检测 | 第32-33页 |
| 2.3.4 Western blot数据分析 | 第33页 |
| 2.3.5 免疫荧光染色（Immunofluorescence Staining） | 第33-34页 |
| 2.3.6 RNA提取 | 第34页 |
| 2.3.7 反转录 | 第34-35页 |
| 2.3.8 Realtime PCR反应 | 第35页 |
| 2.3.9 hMOF萤光素酶报告基因检测 | 第35-36页 |
| 2.4 实验结果 | 第36-41页 |
| 2.4.2 三氧化二砷对组蛋白H4乙酰化修饰的调控 | 第36-38页 |
| 2.4.3 三氧化二砷不影响hMOF的转录水平 | 第38-39页 |
| 2.4.4 三氧化二砷不影响细胞中hMOF的蛋白表达水平 | 第39-41页 |
| 2.5 小结 | 第41-43页 |
| 第3章 三氧化二砷对hMOF乙酰转移酶活性的调控机制研究 | 第43-58页 |
| 3.1 引言 | 第43-44页 |
| 3.2 材料与仪器 | 第44-45页 |
| 3.2.1 细胞 | 第44页 |
| 3.2.2 抗体 | 第44页 |
| 3.2.3 重组质粒 | 第44页 |
| 3.2.4 合成肽 | 第44页 |
| 3.2.5 实验试剂 | 第44-45页 |
| 3.2.6 实验仪器 | 第45页 |
| 3.3 试验方法 | 第45-49页 |
| 3.3.1 HA‐h MOF重组蛋白在Sf21昆虫细胞中的表达纯化 | 第45-46页 |
| 3.3.2 体外HAT活性检测（HAT assay） | 第46-47页 |
| 3.3.3 As‐immobilized agarose的构建 | 第47-48页 |
| 3.3.4 Western blot检测 | 第48页 |
| 3.3.5 Western blot数据分析 | 第48页 |
| 3.3.6 Arsenic‐immobilized agarose亲和沉淀实验 | 第48-49页 |
| 3.3.7 hMOF合成肽的体外合成 | 第49页 |
| 3.3.8 MALDI‐TOF MS | 第49页 |
| 3.3.9 紫外吸光度检测 | 第49页 |
| 3.3.10 hMOF三结构维模型的构建 | 第49页 |
| 3.4 实验结果 | 第49-56页 |
| 3.4.1 三氧化二砷抑制hMOF的乙酰转移酶活性 | 第49-51页 |
| 3.4.2 三氧化二砷与hMOF直接相互结合 | 第51-53页 |
| 3.4.3 三氧化二砷与hMOF结合位点的确认 | 第53-55页 |
| 3.4.4 砷原子与hMOF结合的三维结构模拟 | 第55-56页 |
| 3.5 小结 | 第56-58页 |
| 第4章 三氧化二砷对组蛋白去乙酰转移酶HDAC4的调控机制研究 | 第58-74页 |
| 4.1 引言 | 第58-59页 |
| 4.1.1 染色质免疫沉淀（CHIP） | 第58-59页 |
| 4.2 材料与仪器 | 第59-62页 |
| 4.2.1 细胞株 | 第59页 |
| 4.2.2 抗体 | 第59页 |
| 4.2.3 siRNA | 第59页 |
| 4.2.4 RT‐PCR引物 | 第59-60页 |
| 4.2.5 HDAC4 CHIP引物 | 第60-61页 |
| 4.2.6 实验试剂 | 第61页 |
| 4.2.7 实验仪器 | 第61-62页 |
| 4.3 试验方法 | 第62-66页 |
| 4.3.1 细胞培养及三氧化二砷处理 | 第62页 |
| 4.3.2 Western blot检测 | 第62-63页 |
| 4.3.3 Western blot数据分析 | 第63页 |
| 4.3.4 免疫荧光染色 | 第63页 |
| 4.3.5 过表达hMOF | 第63-64页 |
| 4.3.6 si RNA敲低hMOF及HDAC4 | 第64页 |
| 4.3.7 DNA芯片数据分析 | 第64-65页 |
| 4.3.8 hMOF在HDAC4上的CHIP | 第65-66页 |
| 4.4 实验结果 | 第66-72页 |
| 4.4.1 三氧化二砷对HDACs蛋白表达水平的影响 | 第66-69页 |
| 4.4.2 敲低hMOF上调HDAC4的转录和表达 | 第69-70页 |
| 4.4.3 HDAC4不调控细胞内H4K16ac水平 | 第70-71页 |
| 4.4.4 三氧化二砷阻断hMOF在HDAC4转录起始位点的募集 | 第71-72页 |
| 4.5 小结 | 第72-74页 |
| 第5章h MOF降低三氧化二砷的细胞毒性 | 第74-89页 |
| 5.1 引言 | 第74-75页 |
| 5.1.1 线粒体膜电位检测（JC‐1 染色） | 第74-75页 |
| 5.2 材料与仪器 | 第75-77页 |
| 5.2.1 细胞 | 第75页 |
| 5.2.2 抗体 | 第75页 |
| 5.2.3 重组质粒 | 第75页 |
| 5.2.4 siRNA | 第75-76页 |
| 5.2.5 实验试剂 | 第76页 |
| 5.2.6 实验仪器 | 第76-77页 |
| 5.3 试验方法 | 第77-80页 |
| 5.3.1 hMOF在HEK293T细胞中的过表达 | 第77页 |
| 5.3.2 Lipofectamine RNAiMAX转染siRNA | 第77-78页 |
| 5.3.3 Western blot检测 | 第78-79页 |
| 5.3.4 Western blot数据分析 | 第79页 |
| 5.3.5 MTT实验 | 第79页 |
| 5.3.6 流式细胞分析 | 第79-80页 |
| 5.3.7 JC‐1 染色 | 第80页 |
| 5.4 实验结果 | 第80-87页 |
| 5.4.1 过表达hMOF逆转三氧化二砷对H4K16ac的下调 | 第80-81页 |
| 5.4.2 过表达hMOF抑制三氧化二砷上调HDAC4 | 第81-82页 |
| 5.4.3 过表达hMOF增强细胞对三氧化二砷的抗性 | 第82-85页 |
| 5.4.4 敲低hMOF增强HeLa细胞对三氧化二砷敏感性 | 第85-87页 |
| 5.5 小结 | 第87-89页 |
| 第6章 结论与展望 | 第89-92页 |
| 6.1 结论 | 第89-90页 |
| 6.2 后续展望 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-101页 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 | 第101-103页 |
| 致谢 | 第103页 |
