| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 缩略语 | 第10-18页 |
| 第一部分 RNA相关p53相互作用蛋白质的鉴定及功能研究 | 第18-108页 |
| 第一章 引言 | 第18-24页 |
| 1 p53蛋白功能与调控 | 第18-20页 |
| 1.1 p53蛋白结构与功能 | 第18-19页 |
| 1.2 p53蛋白与RNA调控 | 第19-20页 |
| 2 核不均一核糖核蛋白C（hnRNPC）结构与功能 | 第20-21页 |
| 3 蛋白结合RNA的研究方法 | 第21-24页 |
| 第二章 RNA相关p53相互作用蛋白质的筛选鉴定 | 第24-34页 |
| 1 材料与方法 | 第24-29页 |
| 1.1 实验材料 | 第24-26页 |
| 1.1.1 细胞株与质粒 | 第24页 |
| 1.1.2 主要仪器 | 第24页 |
| 1.1.3 实验试剂与溶液 | 第24-26页 |
| 1.2 实验方法 | 第26-29页 |
| 1.2.1 细胞培养与转染 | 第26-27页 |
| 1.2.2 免疫共沉淀 | 第27-28页 |
| 1.2.3 蛋白质谱检测与分析 | 第28-29页 |
| 2 结果与讨论 | 第29-34页 |
| 2.1 实验结果 | 第29-31页 |
| 2.1.1 RNA相关p53相互作用蛋白筛选方法的建立 | 第29页 |
| 2.1.2 分析鉴定RNA相关p53相互作用蛋白 | 第29-31页 |
| 2.2 讨论 | 第31-34页 |
| 第三章 RNA介导p53与NCL、ILF3及HSPD1相互作用 | 第34-48页 |
| 1 材料与方法 | 第34-44页 |
| 1.1 实验材料 | 第34-38页 |
| 1.1.1 质粒、菌株及细胞株 | 第34页 |
| 1.1.2 主要仪器 | 第34页 |
| 1.1.3 实验试剂与溶液 | 第34-38页 |
| 1.2 实验方法 | 第38-44页 |
| 1.2.1 细胞培养与转染 | 第38-39页 |
| 1.2.2 细胞RNA提取与检测 | 第39-40页 |
| 1.2.3 表达载体构建与质粒提取 | 第40-43页 |
| 1.2.4 荧光素酶报告基因分析 | 第43页 |
| 1.2.5 免疫共沉淀 | 第43-44页 |
| 2 结果与讨论 | 第44-48页 |
| 2.1 实验结果 | 第44-46页 |
| 2.1.1 RNA介导p53与NCL、ILF3及HSPD1结合 | 第44-45页 |
| 2.1.2 NCL及HSPD1调控p53蛋白转录活性 | 第45-46页 |
| 2.2 讨论 | 第46-48页 |
| 第四章 RNA阻抑hnRNPC对p53的调控 | 第48-78页 |
| 1 材料与方法 | 第48-60页 |
| 1.1 实验材料 | 第48-52页 |
| 1.1.1 质粒、菌株及细胞株 | 第48页 |
| 1.1.2 主要仪器 | 第48-49页 |
| 1.1.3 实验试剂与溶液 | 第49-52页 |
| 1.2 实验方法 | 第52-60页 |
| 1.2.1 细胞培养与转染 | 第52-53页 |
| 1.2.2 免疫共沉淀及Western blot | 第53-55页 |
| 1.2.3 RNA提取与检测 | 第55-56页 |
| 1.2.4 表达载体构建与质粒提取 | 第56-59页 |
| 1.2.5 荧光素酶报告基因分析 | 第59页 |
| 1.2.6 免疫荧光 | 第59页 |
| 1.2.7 GST pulldown实验 | 第59-60页 |
| 1.2.8 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第60页 |
| 1.2.9 CCK8细胞增殖检测 | 第60页 |
| 2 结果与讨论 | 第60-78页 |
| 2.1 实验结果 | 第60-75页 |
| 2.1.1 hnRNPC与p53蛋白细胞核内共定位 | 第60-61页 |
| 2.1.2 hnRNPC与p53细胞内外相互作用鉴定 | 第61-63页 |
| 2.1.3 hnRNPC与p53相互作用结构域鉴定 | 第63-65页 |
| 2.1.4 hnRNPC表达抑制可增加p53蛋白稳定性 | 第65-69页 |
| 2.1.5 hnRNPC蛋白抑制p53蛋白的转录活性 | 第69-70页 |
| 2.1.6 hnRNPC表达抑制可抑制细胞增殖 | 第70-72页 |
| 2.1.7 hnRNPC表达抑制促进p53依赖的细胞凋亡 | 第72-75页 |
| 2.2 讨论 | 第75-78页 |
| 第五章 p53结合RNA筛选与功能初探 | 第78-106页 |
| 1 材料与方法 | 第78-90页 |
| 1.1 实验材料 | 第78-83页 |
| 1.1.1 质粒、菌株及细胞株 | 第78页 |
| 1.1.2 主要仪器 | 第78页 |
| 1.1.3 实验试剂与溶液 | 第78-83页 |
| 1.2 实验方法 | 第83-90页 |
| 1.2.1 细胞培养与转染 | 第83-84页 |
| 1.2.2 高通量测序-紫外交联免疫共沉淀（HITS-CLIP） | 第84-88页 |
| 1.2.3 RNA免疫沉淀（RIP） | 第88-89页 |
| 1.2.4 RNA pulldown | 第89页 |
| 1.2.5 测序数据GO分析 | 第89-90页 |
| 2 结果与讨论 | 第90-106页 |
| 2.1 实验结果 | 第90-103页 |
| 2.1.1 p53与RNA分子直接相互作用 | 第90页 |
| 2.1.2 HITS-CLIP方法筛选获得p53蛋白结合RNA | 第90-91页 |
| 2.1.3 p53蛋白结合RNA靶点测序信息分析 | 第91-92页 |
| 2.1.4 p53蛋白作用的编码基因RNA靶位点GO分析 | 第92-98页 |
| 2.1.5 多种mRNA及非编码RNA与p53相互作用 | 第98-101页 |
| 2.1.6 非编码RNA miR143HG与p53蛋白直接相互作用 | 第101-102页 |
| 2.1.7 p53调控p53相互作用RNA的含量 | 第102-103页 |
| 2.2 讨论 | 第103-106页 |
| 结论 | 第106-108页 |
| 第二部分 MTRAP-MS方法研究MEG3-蛋白相互作用 | 第108-128页 |
| 第一章引言 | 第108-114页 |
| 1 长链非编码RNA研究发展 | 第108-110页 |
| 1.1 长链非编码RNA | 第108-109页 |
| 1.2 长链非编码RNA功能 | 第109-110页 |
| 1.3 长链非编码RNA MEG3 | 第110页 |
| 2 RNA-蛋白质相互作用研究方法 | 第110-114页 |
| 第二章 MTRAP-MS方法研究分析MEG3-蛋白相互作用 | 第114-126页 |
| 1 材料与方法 | 第114-116页 |
| 1.1 实验材料 | 第114页 |
| 1.1.1 实验细胞 | 第114页 |
| 1.1.2 实验试剂 | 第114页 |
| 1.2 实验方法 | 第114-116页 |
| 1.2.1 蛋白质谱分析 | 第114-115页 |
| 1.2.2 emPAI非标记蛋白定量 | 第115页 |
| 1.2.3 蛋白GO分析 | 第115页 |
| 1.2.4 蛋白相互作用分析（STRING Database） | 第115页 |
| 1.2.5 MTRAP方法 | 第115页 |
| 1.2.6 RNA pulldown | 第115-116页 |
| 2 结果与讨论 | 第116-126页 |
| 2.1 实验结果 | 第116-122页 |
| 2.1.1 MEG3结合蛋白质谱分析、筛选与鉴定 | 第116-117页 |
| 2.1.2 差异蛋白质的GO注释和分析 | 第117-119页 |
| 2.1.3 MEG3结合蛋白的作用网络 | 第119-120页 |
| 2.1.4 MEG3相互作用蛋白的验证 | 第120-122页 |
| 2.2 讨论 | 第122-126页 |
| 结论 | 第126-128页 |
| 参考文献 | 第128-138页 |
| 作者简介及科研成果 | 第138-140页 |
| 致谢 | 第140页 |
