| 目录 | 第4-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 缩略词与中英文对照表 | 第14-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-32页 |
| 1.1 柑橘黄龙病的症状 | 第17-19页 |
| 1.2 柑橘黄龙病的病原研究及其传播介体 | 第19-23页 |
| 1.2.1 嫁接传染性的证实 | 第19页 |
| 1.2.2 细菌性病害的确定 | 第19-20页 |
| 1.2.3 韧皮部杆菌的鉴定和分类 | 第20-22页 |
| 1.2.4 分离培养的探索 | 第22页 |
| 1.2.5 传播媒介昆虫 | 第22-23页 |
| 1.3 中国柑橘斑驳型黄化症状相关病原的种类 | 第23页 |
| 1.4 'Candidatus Liberibacter asiaticus'的种群分化研究进展 | 第23-25页 |
| 1.5 'Ca.L.asiaticus'基因组学和基因功能研究进展 | 第25-32页 |
| 1.5.1 'Ca.L.asiaticus'基因组和比较基因组学研究进展 | 第27-28页 |
| 1.5.2 'Ca.L.asiaticus'基因功能研究进展 | 第28-32页 |
| 第二章 前言 | 第32-34页 |
| 第三章 柑橘黄龙病病原培养探索 | 第34-40页 |
| 3.1 本章实验技术路线 | 第34页 |
| 3.2 实验材料、仪器与试剂 | 第34-35页 |
| 3.2.1 供试材料 | 第34页 |
| 3.2.2 主要试剂、耗材与仪器 | 第34-35页 |
| 3.2.3 本章所需试剂及其配制 | 第35页 |
| 3.3 实验方法 | 第35-36页 |
| 3.3.1 利用2009年已报道黄龙病培养基进行分离培养尝试 | 第35页 |
| 3.3.2 'Ca.L.asiaticus'缺陷成份、可利用成份和其他候选成份选择 | 第35-36页 |
| 3.3.3 自配培养基培养尝试 | 第36页 |
| 3.3.4 中慢生根瘤菌培养基和全人工合成培养基尝试 | 第36页 |
| 3.4 结果与分析 | 第36-39页 |
| 3.4.1 2009年已报道黄龙病培养基分离培养尝试 | 第36页 |
| 3.4.2 人工厌氧条件的设计 | 第36-38页 |
| 3.4.3 自配Liber系列培养基尝试 | 第38页 |
| 3.4.4 慢生和中慢生根瘤菌培养基培养尝试 | 第38-39页 |
| 3.5 讨论 | 第39页 |
| 3.6 结论 | 第39-40页 |
| 第四章 柑橘总核酸提取方法改进和HLB检测取样部位选择 | 第40-56页 |
| 4.1 本章实验技术路线 | 第40-41页 |
| 4.2 实验材料、仪器与试剂 | 第41-43页 |
| 4.2.1 供试材料 | 第41页 |
| 4.2.2 主要试剂、耗材与仪器 | 第41-42页 |
| 4.2.3 本章所需试剂的配制 | 第42页 |
| 4.2.4 本章所用引物 | 第42-43页 |
| 4.3 实验方法 | 第43-49页 |
| 4.3.1 柑橘总核酸微量快速抽提法(葡聚糖柱法) | 第43页 |
| 4.3.2 传统CTAB抽提法 | 第43页 |
| 4.3.3 CTAB增效剂和抗低温析出剂筛选 | 第43-44页 |
| 4.3.4 柑橘高质量总核酸CTAB-Triton提取法的建立 | 第44-46页 |
| 4.3.5 CTAB-Triton法与常规CTAB法、葡聚糖柱法和试剂盒抽提质量比较 | 第46-47页 |
| 4.3.6 韧皮部杆菌在柑橘叶片中的相对含量和取样部位的选择 | 第47-49页 |
| 4.4 结果与分析 | 第49-53页 |
| 4.4.1 CTAB-Triton抽提液抗低温特性 | 第49页 |
| 4.4.2 DNA抽提质量比较 | 第49-52页 |
| 4.4.3 Real-Time PCR检测叶片各部位'Ca.L.asiaticus'相对含量和取样部位选择 | 第52-53页 |
| 4.5 讨论 | 第53-54页 |
| 4.6 结论 | 第54-56页 |
| 第五章 中国柑橘系统性黄化样品中韧皮部杆菌和植原体调查 | 第56-68页 |
| 5.1 本章实验技术路线 | 第57页 |
| 5.2 实验材料、仪器与试剂 | 第57-58页 |
| 5.2.1 供试材料 | 第57页 |
| 5.2.2 主要试剂与仪器 | 第57页 |
| 5.2.3 本章所需试剂的配制 | 第57页 |
| 5.2.4 本章所用引物 | 第57-58页 |
| 5.3 实验方法 | 第58-62页 |
| 5.3.1 植原体巢式PCR检测体系的确立 | 第58-60页 |
| 5.3.2 田间样品的采集 | 第60-61页 |
| 5.3.3 韧皮部杆菌的检测与鉴定 | 第61-62页 |
| 5.3.4 植原体的检测 | 第62页 |
| 5.3.5 室内嫁接传染与症状观察 | 第62页 |
| 5.4 结果与分析 | 第62-66页 |
| 5.4.1 通用植原体巢式PCR检测体系的确立 | 第62-63页 |
| 5.4.2 田间柑橘系统性黄化样品韧皮部杆菌和植原体检测 | 第63-65页 |
| 5.4.3 'Ca.L.asiaticus'阳性样品嫁接传染与症状观察 | 第65-66页 |
| 5.5 讨论 | 第66-67页 |
| 5.6 结论 | 第67-68页 |
| 第六章 基于比较基因组学的'Ca.L.asiaticus'多态性位点筛选 | 第68-106页 |
| 6.1 本章实验技术路线 | 第69页 |
| 6.2 实验材料、仪器与试剂 | 第69-70页 |
| 6.2.1 供试材料 | 第69页 |
| 6.2.2 主要试剂与仪器 | 第69-70页 |
| 6.2.3 本章所需试剂的配制 | 第70页 |
| 6.3 实验方法 | 第70-76页 |
| 6.3.1 'Ca.L.asiaticus'基因组位点随机筛选 | 第70页 |
| 6.3.2 基因组比较分析和差异位点筛选 | 第70页 |
| 6.3.3 引物设计 | 第70-71页 |
| 6.3.4 PCR扩增与高分辨率琼脂糖凝胶电泳 | 第71-72页 |
| 6.3.5 候选引物退火温度优化 | 第72页 |
| 6.3.6 PCR产物胶回收纯化 | 第72页 |
| 6.3.7 平末端产物加A | 第72-73页 |
| 6.3.8 加A产物与T-载体连接 | 第73页 |
| 6.3.9 重组T-载体转化大肠杆菌 | 第73-74页 |
| 6.3.10 阳性克隆子的筛选与测序 | 第74页 |
| 6.3.11 序列分析 | 第74页 |
| 6.3.12 中国9省CLas样品PCR扩增 | 第74-75页 |
| 6.3.13 PCR产物聚丙烯酰胺凝胶电泳和快速银染 | 第75-76页 |
| 6.3.14 带型读取、校准及CLas种群遗传分化分析 | 第76页 |
| 6.4 结果与分析 | 第76-104页 |
| 6.4.1 'Ca.L.asiaticus'与根瘤菌科成员基因组比较分析 | 第76-82页 |
| 6.4.2 引物设计 | 第82-85页 |
| 6.4.3 随机选择和比较基因组筛选的差异位点PCR扩增 | 第85-87页 |
| 6.4.4 候选引物最佳退火温度筛选 | 第87-90页 |
| 6.4.5 差异位点克隆测序 | 第90-91页 |
| 6.4.6 中国CLas样品PCR扩增 | 第91-95页 |
| 6.4.7 PCR产物PAGE电泳 | 第95-100页 |
| 6.4.8 Structure软件分析不同地区'Ca.L.asiaticus'种群结构 | 第100-102页 |
| 6.4.9 PowerMarker软件分析不同地区'Ca.L.asiaticus'种群多样性 | 第102-103页 |
| 6.4.10 中国'Ca.L.asiaticus'种群流行与起源推测 | 第103-104页 |
| 6.5 讨论 | 第104-105页 |
| 6.6 结论 | 第105-106页 |
| 第七章 亚洲种韧皮部杆菌原噬菌体溶菌酶基因原核表达载体的构建与蛋白表达 | 第106-122页 |
| 7.1 本章实验技术路线 | 第107页 |
| 7.2 实验材料、仪器与试剂 | 第107-108页 |
| 7.2.1 实验材料与仪器设备 | 第107页 |
| 7.2.2 本章所需试剂及其配制 | 第107-108页 |
| 7.3 实验方法 | 第108-113页 |
| 7.3.1 韧皮部杆菌原噬菌体溶菌酶蛋白生物信息学分析 | 第108页 |
| 7.3.2 原核表达载体的选择与引物设计 | 第108页 |
| 7.3.3 韧皮部杆菌原噬菌体溶菌酶基因的高保真酶PCR扩增 | 第108-109页 |
| 7.3.4 PCR产物的纯化与克隆测序 | 第109页 |
| 7.3.5 重组原核表达载体的构建 | 第109-110页 |
| 7.3.6 大肠杆菌原核表达菌株的选择与重组表达质粒转化 | 第110-111页 |
| 7.3.7 溶菌酶蛋白表达诱导条件的选择与优化 | 第111-112页 |
| 7.3.8 溶菌酶蛋白的大量诱导表达与纯化 | 第112-113页 |
| 7.4 结果与分析 | 第113-119页 |
| 7.4.1 韧皮部杆菌原噬菌体溶菌酶蛋白生物信息学分析 | 第113-116页 |
| 7.4.2 韧皮部杆菌原噬菌体溶菌酶基因的高保真酶PCR扩增 | 第116页 |
| 7.4.3 PCR产物平末端克隆重组子菌液PCR鉴定与测序 | 第116-117页 |
| 7.4.4 原核表达重组质粒鉴定 | 第117-118页 |
| 7.4.5 诱导条件的优化及溶菌酶蛋白表达 | 第118页 |
| 7.4.6 溶菌酶蛋白的柱纯化和几丁质标签的去除 | 第118-119页 |
| 7.5 讨论 | 第119页 |
| 7.6 结论 | 第119-122页 |
| 第八章 主要结论、创新点与研究展望 | 第122-124页 |
| 8.1 主要结论 | 第122-123页 |
| 8.1.1 开发了一种增强型核酸提取配方 | 第122页 |
| 8.1.2 明确了韧皮部杆菌在柑橘叶片中的分布情况和HLB检测取样部位的选择 | 第122页 |
| 8.1.3 调查我国引起柑橘系统性黄化症状的主要病因并总结CLas田间诊断标准 | 第122页 |
| 8.1.4 通过比较基因组筛选评估中国CLas种群分化的变异位点并进行流行推测 | 第122页 |
| 8.1.5 找出尝试利用溶菌酶防治HLB的新思路并表达出(原)噬菌体源溶菌酶蛋白 | 第122-123页 |
| 8.2 创新点 | 第123页 |
| 8.3 研究展望 | 第123-124页 |
| 参考文献 | 第124-136页 |
| 附录Ⅰ 本论文所涉及的试剂与仪器设备 | 第136-138页 |
| 附录Ⅱ HLB病原探索性培养用培养基 | 第138-160页 |
| 附录Ⅲ 本论文所用试剂及其储备液的配制 | 第160-172页 |
| 致谢 | 第172-174页 |
| 攻读学位期间发表论文及参加科研项目 | 第174-175页 |
