| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-29页 |
| ·猪圆环病毒2 型的国内外研究概况 | 第13-17页 |
| ·病原学 | 第13-14页 |
| ·流行病学 | 第14-15页 |
| ·PCV2 对机体免疫系统的影响 | 第15-16页 |
| ·PCV2 的诊断 | 第16页 |
| ·PCV2 的防治进展 | 第16-17页 |
| ·RNAI 技术研究进展 | 第17-26页 |
| ·RNAi 的特征 | 第18-19页 |
| ·RNAi 的作用机理 | 第19-21页 |
| ·RNAi 应用于哺乳动物细胞的研究策略 | 第21-24页 |
| ·RNAi 在哺乳动物中的应用和研究进展 | 第24-26页 |
| ·研究内容和技术路线 | 第26-27页 |
| ·研究内容 | 第26-27页 |
| ·技术路线 | 第27页 |
| ·研究目的与意义 | 第27页 |
| ·研究目标 | 第27-29页 |
| 第二章 SIRNA 序列的设计与 PGENSIL-SHRNA 表达质粒的构建 | 第29-41页 |
| ·材料 | 第29-31页 |
| ·质粒和菌株 | 第29页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第29页 |
| ·质粒DNA 小量提取用试剂 | 第29-30页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳所用溶液 | 第30-31页 |
| ·主要仪器设备 | 第31页 |
| ·方法 | 第31-36页 |
| ·siRNA 靶序列的选择 | 第31-32页 |
| ·编码shRNA 的DNA 单链的设计与合成 | 第32-33页 |
| ·siRNA 表达质粒的构建 | 第33-35页 |
| ·pGensil-shRNA 质粒的鉴定和制备 | 第35-36页 |
| ·结果与分析 | 第36-39页 |
| ·siRNA 靶序列局部二级结构预测 | 第36-38页 |
| ·pGensil-shRNA 质粒的PCR 鉴定 | 第38页 |
| ·pGensil-shRNA 质粒的PCR 产物的测序结果 | 第38页 |
| ·pGensil-shRNA 质粒纯度测定 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39页 |
| ·小结 | 第39-41页 |
| 第三章 基于质粒表达的SIRNA 在PK-15 细胞中对PCV2 复制的抑制效应 | 第41-63页 |
| ·材料 | 第41-44页 |
| ·病毒与细胞株 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41-42页 |
| ·RNA 和DNA 提取试剂 | 第42页 |
| ·细胞培养用溶液 | 第42-43页 |
| ·SDS-PAGE 和免疫印迹所用试剂及材料 | 第43-44页 |
| ·过氧化物酶单层试验所用试剂及材料 | 第44页 |
| ·主要仪器设备 | 第44页 |
| ·方法 | 第44-50页 |
| ·PCV2 SD/2008 株病毒培养物TCID50 的测定 | 第44页 |
| ·检测PCV2 实时荧光定量PCR 标准曲线的建立 | 第44-45页 |
| ·pGensil-shRNA 表达质粒的瞬时转染和转染效率的检测 | 第45-46页 |
| ·不同质粒表达的siRNA 对PCV2 抑制效果的检测 | 第46-49页 |
| ·siRNA 表达质粒抑制PCV2 复制的时效性分析 | 第49页 |
| ·抑制作用量-效关系的分析 | 第49-50页 |
| ·针对不同靶位的siRNA 表达质粒对PCV2 协同抑制效应的检测 | 第50页 |
| ·数据表示和统计分析 | 第50页 |
| ·结果与分析 | 第50-61页 |
| ·PCV2 SD/2008 病毒液TCID50 的测定 | 第50页 |
| ·检测PCV2 的Real-time FQ-PCR 标准曲线 | 第50-51页 |
| ·siRNA 表达质粒的转染效率 | 第51页 |
| ·质粒表达的siRNA 能够有效地抑制PCV2 在 PK-15 细胞内增殖 | 第51-56页 |
| ·siRNA 表达质粒转染后对PCV2 的抑制的时效性分析 | 第56-58页 |
| ·质粒表达的siRNA 对PCV2 的抑制作用具有量-效性 | 第58-59页 |
| ·混合不同pGensil-shRNA 表达质粒对PCV2 的抑制效应具有协同作用 | 第59-61页 |
| ·讨论 | 第61-62页 |
| ·小结 | 第62-63页 |
| 第四章 基于质粒表达的SIRNA 对PCV2 在小鼠体内增殖及致病性的抑制效应 | 第63-84页 |
| ·材料 | 第63-66页 |
| ·试验动物 | 第63页 |
| ·主要试剂 | 第63页 |
| ·质粒DNA 提取用溶液 | 第63-65页 |
| ·ELISIA 用溶液 | 第65页 |
| ·HE 染色及免疫组化试剂 | 第65-66页 |
| ·其他试剂 | 第66页 |
| ·主要仪器 | 第66页 |
| ·方法 | 第66-71页 |
| ·pGensil-shRNA 表达质粒的大量提取及纯化 | 第66-67页 |
| ·小鼠抗PCV2 抗体的制备 | 第67-68页 |
| ·动物试验设计、pGensil-shRNA 表达质粒体内注射及攻毒 | 第68页 |
| ·临床症状、剖检病变及体重变化的观察 | 第68页 |
| ·PCV2 特异性抗体的检测 | 第68-69页 |
| ·血清中PCV2 核酸的检测 | 第69页 |
| ·组织中PCV2 核酸的检测 | 第69-70页 |
| ·组织病理学检测 | 第70页 |
| ·免疫组化检测 | 第70-71页 |
| ·组织中pGensil-shRNA 表达质粒的检测 | 第71页 |
| ·数据表示和统计分析 | 第71页 |
| ·结果与分析 | 第71-82页 |
| ·PCV2 特异性抗体 | 第71-72页 |
| ·临床症状、肉眼病变及体重 | 第72-73页 |
| ·接种siRNA 表达质粒的小鼠血清中仅出现低水平的PCV2 特异性抗体 | 第73-74页 |
| ·siRNA 表达质粒显著降低了小鼠病毒血症的阳性率 | 第74-75页 |
| ·质粒表达的siRNA 降低了组织中PCV2 核酸的含量 | 第75-76页 |
| ·质粒表达的siRNA 减轻了PCV2 引起的组织病变 | 第76-79页 |
| ·质粒表达的siRNA 降低了小鼠淋巴组织中PCV2 的载量 | 第79-81页 |
| ·siRNA 表达质粒可以在组织中稳定存在 | 第81-82页 |
| ·讨论 | 第82-83页 |
| ·小结 | 第83-84页 |
| 第五章 结论 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-93页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第93-94页 |
| 作者简介 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
