| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 引言 | 第10-16页 |
| ·乙型脑炎概述 | 第10页 |
| ·乙型脑炎流行病学 | 第10-11页 |
| ·流行现状 | 第10-11页 |
| ·流行病学 | 第11页 |
| ·乙型脑炎病原学及乙脑的危害 | 第11-12页 |
| ·病原学 | 第11-12页 |
| ·乙脑的危害 | 第12页 |
| ·乙型脑炎病毒的生物学功能与特性 | 第12-14页 |
| ·基因组结构 | 第12页 |
| ·蛋白的结构与功能 | 第12-13页 |
| ·非结构蛋白 | 第13-14页 |
| ·乙型脑炎的预防 | 第14-15页 |
| ·乙型脑炎的诊断 | 第15页 |
| ·病毒的分离鉴定 | 第15页 |
| ·血清学诊断方法 | 第15页 |
| ·本研究的目的意义 | 第15-16页 |
| 2 乙型脑炎病毒NS1 蛋白基因密码子优化 | 第16-21页 |
| ·材料 | 第16-17页 |
| ·菌种、质粒 | 第16页 |
| ·主要试剂 | 第16页 |
| ·Opti-NS1 基因的密码子改造 | 第16-17页 |
| ·方法 | 第17-18页 |
| ·opti-NS1 蛋白原核表达载体的构建 | 第17-18页 |
| ·Opti-NS1 与NS1 基因的诱导表达及表达产物的分析 | 第18页 |
| ·表达产物的Western-blot 检测 | 第18页 |
| ·结果 | 第18-20页 |
| ·重组质粒PET30a-opti-NS1 的酶切鉴定 | 第18-19页 |
| ·重组质粒PET30a-opti-NS1 的测序鉴定 | 第19页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE 电泳分析 | 第19页 |
| ·表达产物的Western-blot 检测 | 第19-20页 |
| ·讨论 | 第20-21页 |
| 3 乙型脑炎病毒NS1 蛋白的可溶性表达与抗原性分析 | 第21-26页 |
| ·材料 | 第21-22页 |
| ·质粒、菌种与血清 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·NS1 融合蛋白重组表达质粒的构建 | 第21页 |
| ·重组融合蛋白的诱导表达与SDS- PAGE 分析 | 第21页 |
| ·MBP- NS1 的纯化重组菌进行大量诱导表达 | 第21-22页 |
| ·重组蛋白的Western blot 分析 | 第22页 |
| ·间接ELISA 方法的建立 | 第22页 |
| ·结果 | 第22-25页 |
| ·重组质粒pc5X- NS1 的构建 | 第22-23页 |
| ·表达产物的SDS- PAGE 电泳分析 | 第23页 |
| ·表达产物的纯化 | 第23-24页 |
| ·表达产物的western blot 检测 | 第24页 |
| ·表达产物的间接ELISA 建立 | 第24-25页 |
| ·讨论 | 第25-26页 |
| 4 乙型脑炎病毒 NS1 蛋白单克隆抗体的制备 | 第26-36页 |
| ·材料 | 第26-27页 |
| ·细胞与实验动物 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26页 |
| ·试剂配制 | 第26-27页 |
| ·方法 | 第27-30页 |
| ·动物的免疫 | 第27页 |
| ·细胞融合 | 第27-29页 |
| ·阳性单克隆细胞株的筛选 | 第29页 |
| ·细胞的冻存 | 第29页 |
| ·杂交瘤细胞的复苏 | 第29页 |
| ·单抗腹水的制备 | 第29-30页 |
| ·单克隆抗体特性的鉴定 | 第30页 |
| ·结果 | 第30-34页 |
| ·免疫原的制备 | 第30-31页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第31页 |
| ·Western blot 结果 | 第31-32页 |
| ·间接免疫荧光试验结果 | 第32-33页 |
| ·单克隆抗体效价及亚型的测定 | 第33-34页 |
| ·讨论 | 第34-36页 |
| 5 乙型脑炎病毒 NS1 蛋白病毒特异性抗原表位的鉴定 | 第36-50页 |
| ·材料和方法 | 第36-42页 |
| ·实验材料 | 第36页 |
| ·NS1 蛋白的分段设计 | 第36-39页 |
| ·短肽融合蛋白的表达 | 第39页 |
| ·抗原表位的初步鉴定 | 第39页 |
| ·抗原表位的精确定位 | 第39-42页 |
| ·结果 | 第42-46页 |
| ·短肽融合蛋白的表达 | 第42页 |
| ·抗原表位定位 | 第42-46页 |
| ·表位截取后的结果 | 第46-49页 |
| ·讨论 | 第49-50页 |
| 6 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 作者简历 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-58页 |
| 在读期间成发表的论文 | 第58-59页 |
