| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 本文常用缩写词中英文对照 | 第7-12页 |
| 1 前言 | 第12-17页 |
| 1.1 猪圆环病毒2型研究进展 | 第12-16页 |
| 1.1.1 病原学 | 第12页 |
| 1.1.2 培养特性 | 第12-13页 |
| 1.1.3 病毒基因组 | 第13页 |
| 1.1.4 编码的主要蛋白 | 第13-14页 |
| 1.1.5 主要免疫优势表位 | 第14-15页 |
| 1.1.6 防控措施 | 第15-16页 |
| 1.2 本研究的目的和意义 | 第16-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-33页 |
| 2.1 材料 | 第17-19页 |
| 2.1.1 质粒、菌株、毒株和血清 | 第17页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第17页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第17-18页 |
| 2.1.4 本文主要试剂配制方法 | 第18-19页 |
| 2.1.4.1 SDS-PAGE所用溶液的配制 | 第18页 |
| 2.1.4.2 Western blot所用溶液的配制 | 第18-19页 |
| 2.1.4.3 其它试剂的配制 | 第19页 |
| 2.2 方法 | 第19-33页 |
| 2.2.1 PCV2 cap基因与表位基因的克隆 | 第19-23页 |
| 2.2.1.1 引物设计与合成 | 第19-20页 |
| 2.2.1.2 表位基因的合成 | 第20-21页 |
| 2.2.1.3 PCV2-LG株DNA的提取 | 第21-22页 |
| 2.2.1.4 PCV2 cap基因和表位基因的扩增 | 第22页 |
| 2.2.1.5 纯化回收目的基因片段 | 第22-23页 |
| 2.2.2 表达载体的构建 | 第23-28页 |
| 2.2.2.1 表达载体pET-cap的构建 | 第23-26页 |
| 2.2.2.2 表达载体pET-B-cap、pET-T-cap和pET-T-B-cap的构建 | 第26-28页 |
| 2.2.3 串联重组蛋白的诱导表达及检测 | 第28-29页 |
| 2.2.3.1 重组蛋白的诱导表达 | 第28页 |
| 2.2.3.2 重组蛋白表达条件的优化 | 第28-29页 |
| 2.2.3.3 重组蛋白的Western blot检测 | 第29页 |
| 2.2.4 重组蛋白的制备及内毒素去除处理 | 第29-31页 |
| 2.2.4.1 重组蛋白的可溶性分析 | 第29-30页 |
| 2.2.4.2 重组蛋白准备及内毒素去除 | 第30页 |
| 2.2.4.3 去内毒素处理和复性后重组蛋白的SDS-PAGE检测 | 第30页 |
| 2.2.4.4 处理后重组蛋白的Western blot检测 | 第30页 |
| 2.2.4.5 重组蛋白浓度的测定 | 第30-31页 |
| 2.2.5 疫苗的制备 | 第31页 |
| 2.2.6 重组蛋白免疫原性研究 | 第31-32页 |
| 2.2.6.1 实验动物分组 | 第31页 |
| 2.2.6.2 免疫程序及收集血清 | 第31-32页 |
| 2.2.7 常规ELISA方法操作流程 | 第32页 |
| 2.2.8 间接ELISA检测鼠血清特异性抗体 | 第32-33页 |
| 2.2.8.1 待检血清最佳稀释度的确定 | 第32页 |
| 2.2.8.2 商品化ELISA试剂盒用法 | 第32页 |
| 2.2.8.3 操作步骤 | 第32-33页 |
| 2.2.8.4 注意事项 | 第33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-48页 |
| 3.1 PCV2 cap基因的克隆 | 第33-34页 |
| 3.2 重组表达质粒pET-cap的PCR及双酶切鉴定 | 第34-35页 |
| 3.3 基因序列测定和分析 | 第35页 |
| 3.4 表位基因的扩增 | 第35-36页 |
| 3.5 三种串联重组表达质粒的PCR及双酶切鉴定 | 第36-37页 |
| 3.6 基因序列测定和分析 | 第37页 |
| 3.7 表达产物的鉴定 | 第37-43页 |
| 3.7.1 串联重组蛋白的SDS-PAGE检测 | 第37-42页 |
| 3.7.2 目的蛋白的Western blot检测 | 第42-43页 |
| 3.8 疫苗的制备 | 第43-45页 |
| 3.8.1 内毒素去除效果检测 | 第43页 |
| 3.8.2 内毒素去除及复性处理后的目的蛋白SDS-PAGE检测 | 第43-44页 |
| 3.8.3 内毒素去除及复性后的重组蛋白的Western blot检测 | 第44-45页 |
| 3.8.4 复性后目的蛋白浓度测定 | 第45页 |
| 3.9 间接ELISA检测小鼠免疫后血清抗体 | 第45-48页 |
| 3.9.1 小鼠免疫血清最佳稀释度的确定 | 第45-46页 |
| 3.9.2 酶标二抗最佳工作浓度的确定 | 第46页 |
| 3.9.3 鼠血清ELISA检测结果 | 第46-48页 |
| 4 讨论与结论 | 第48-51页 |
| 全文总结 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 附录A:PCV2 cap基因序列 | 第59-60页 |
| 附录B:三段合成的表位基因序列 | 第60-61页 |
| 附录C:硕士期间科研成果 | 第61页 |
