| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文缩写词 | 第7-12页 |
| 1 前言 | 第12-18页 |
| 1.1 初情期的启动及影响因素 | 第12-13页 |
| 1.2 促性腺激素释放激素调控初情期的启动 | 第13页 |
| 1.3 神经激肽B调控初情期的启动 | 第13-15页 |
| 1.3.1 Neurokinin B简介 | 第13-14页 |
| 1.3.2 Neurokinin B促进初情期的启动 | 第14-15页 |
| 1.3.3 雌激素与Neurokinin B的相互作用 | 第15页 |
| 1.4 转录因子C/EBPβ及YY1研究进展 | 第15-16页 |
| 1.4.1 转录因子C/EBPβ被确认的历程 | 第15页 |
| 1.4.2 转录因子C/EBPβ的生物作用 | 第15页 |
| 1.4.3 转录因子C/EBPβ促进卵巢发育 | 第15-16页 |
| 1.4.4 转录因子YY1确认过程及生物作用 | 第16页 |
| 1.5 转录因子雌激素受体的生物学作用 | 第16-17页 |
| 1.6 本研究的目的意义 | 第17-18页 |
| 1.7 本研究的技术路线 | 第18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-19页 |
| 2.2 实验主要仪器设备 | 第19-20页 |
| 2.3 实验主要试剂来源及配制 | 第20-22页 |
| 2.3.1 实验试剂及来源 | 第20页 |
| 2.3.2 试剂的配制 | 第20-22页 |
| 2.4 实验方法 | 第22-41页 |
| 2.4.1 猪耳组织DNA的提取 | 第22页 |
| 2.4.2 TAC3基因启动子活性分析 | 第22-30页 |
| 2.4.3 TAC3基因核心启动子区转录因子分析 | 第30页 |
| 2.4.4 构建转录因子表达载体 | 第30-32页 |
| 2.4.5 构建雌激素受体结合位点缺失的TAC3基因启动子p GL3载体 | 第32页 |
| 2.4.6 转录因子的超表达 | 第32-33页 |
| 2.4.7 转录因子的干扰表达 | 第33-34页 |
| 2.4.8 雌激素处理 | 第34页 |
| 2.4.9 组织/细胞RNA提取 | 第34-35页 |
| 2.4.10 qRT- PCR定量检测TAC3基因mRNA的相对表达量 | 第35-36页 |
| 2.4.11 Western Blot检测结果 | 第36-38页 |
| 2.4.12 免疫共沉淀 | 第38-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-59页 |
| 3.1 组织总RNA和总DNA的提取 | 第41-42页 |
| 3.2 母猪初情期启动过程中TAC3基因m RNA水平定量分析 | 第42-43页 |
| 3.3 TAC3基因启动子活性分析 | 第43-47页 |
| 3.3.1 TAC3基因的 5’调控区的克隆 | 第43-44页 |
| 3.3.2 基因TAC3的 5’调控区活性分析 | 第44-46页 |
| 3.3.3 基因TAC3启动子正向调控元件结合区活性分析 | 第46-47页 |
| 3.4 转录因子C/EBPβ促进TAC3基因表达 | 第47-52页 |
| 3.4.1 Ch IP验证C/EBPβ与TAC3基因启动子的结合 | 第47-48页 |
| 3.4.2 超表达C/EBPβ后促进TAC3表达 | 第48-50页 |
| 3.4.3 干扰C/EBPβ表达后抑制TAC3表达 | 第50-52页 |
| 3.5 转录因子YY1促进TAC3基因表达 | 第52-57页 |
| 3.5.1 ChIP验证YY1与TAC3基因启动子的结合 | 第52-53页 |
| 3.5.2 超表达转录因子YY1对TAC3影响 | 第53-55页 |
| 3.5.3 干扰YY1表达后抑制TAC3表达 | 第55-57页 |
| 3.6 雌激素抑制TAC3基因的表达 | 第57-59页 |
| 3.6.1 雌激素抑制TAC3基因启动子活性 | 第57-58页 |
| 3.6.2 雌激素抑制TAC3基因的表达 | 第58-59页 |
| 4 讨论与结论 | 第59-65页 |
| 4.1 TAC3在初情期启时在性腺轴的表达变化 | 第59-60页 |
| 4.2 TAC3基因 5’调控区的获得 | 第60-61页 |
| 4.3 猪TAC3基因启动子活性分析 | 第61-62页 |
| 4.4 转录因子C/EBPβ和YY1表达载体及干扰RNA | 第62页 |
| 4.5 转录因子C/EBPβ和YY1对基因TAC3的调控作用 | 第62-63页 |
| 4.6 转录因子ER对基因TAC3的调控作用 | 第63-64页 |
| 4.7 结论 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
