| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 1 前言 | 第11-13页 |
| 2 材料与方法 | 第13-31页 |
| 2.1 实验材料与实验设计 | 第13-14页 |
| 2.2 主要仪器设备 | 第14-15页 |
| 2.3 主要试剂及配制 | 第15-17页 |
| 2.3.1 主要试剂 | 第15-16页 |
| 2.3.2 主要试剂配制 | 第16-17页 |
| 2.3.2.1 克隆和细胞冻存所需试剂配制 | 第16页 |
| 2.3.2.2 SDS-PAGE胶电泳所需试剂的配制 | 第16-17页 |
| 2.3.2.3 Western Blot所需试剂的配制 | 第17页 |
| 2.4 实验方法 | 第17-30页 |
| 2.4.0 细胞培养方法 | 第17-18页 |
| 2.4.0.1 鸡胚成纤维细胞DF-1 的复苏 | 第17-18页 |
| 2.4.0.2 鸡胚成纤维细胞DF-1 的传代培养 | 第18页 |
| 2.4.0.3 鸡胚成纤维细胞DF-1 的冻存 | 第18页 |
| 2.4.1 不同温度刺激DF-1 细胞 | 第18-19页 |
| 2.4.2 DF-1 的总RNA抽提方法 | 第19页 |
| 2.4.3 DF-1 总RNA反转录 | 第19页 |
| 2.4.4 荧光定量PCR引物设计 | 第19-21页 |
| 2.4.5 qRT-PCR检测方法的组分和程序 | 第21页 |
| 2.4.6 Western Bolt检测方法 | 第21-22页 |
| 2.4.6.1 细胞蛋白样品制备 | 第21页 |
| 2.4.6.2 总蛋白的保存 | 第21页 |
| 2.4.6.3 Western Blot检测cHSP25蛋白的表达 | 第21-22页 |
| 2.4.7 细胞凋亡检测 | 第22-23页 |
| 2.4.8 细胞周期检测 | 第23-24页 |
| 2.4.9 siRNA干扰鸡DF-1 中的HSP25基因 | 第24-25页 |
| 2.4.9.1 HSP25干扰片段合成 | 第24页 |
| 2.4.9.2 siRNA-cHSP25转染DF-1 | 第24-25页 |
| 2.4.9.3 cHSP25 siRNA干扰效果检测 | 第25页 |
| 2.4.9.4 热应激下干扰cHSP25对相关基因及细胞的检测 | 第25页 |
| 2.4.10 在鸡DF-1 中过表达cHSP25 | 第25-30页 |
| 2.4.10.1 cHSP25基因分子克隆 | 第25-27页 |
| 2.4.10.2 cHSP25过表达载体构建 | 第27-29页 |
| 2.4.10.3 pcDNA3.1-cHSP25过表达载体转染DF-1 | 第29页 |
| 2.4.10.4 pcDNA3.1-cHSP25过表达载体转染效果检测 | 第29页 |
| 2.4.10.5 热应激下过表达cHSP25对相关基因及细胞的检测 | 第29-30页 |
| 2.5 数据分析 | 第30-31页 |
| 3 结果 | 第31-68页 |
| 3.1 干扰cHSP25基因对鸡DF-1 细胞系的影响 | 第31-35页 |
| 3.1.1 cHSP25干扰片段转染效果 | 第31-33页 |
| 3.1.1.1 转染干扰片段的DF-1 细胞形态 | 第31页 |
| 3.1.1.2 细胞总RNA抽提和反转录 | 第31-32页 |
| 3.1.1.3 cHSP25的干扰效果 | 第32-33页 |
| 3.1.2 干扰cHSP25对其它HSPs的影响 | 第33-34页 |
| 3.1.3 干扰cHSP25对细胞凋亡和细胞周期的影响 | 第34-35页 |
| 3.2 过表达cHSP25基因对鸡DF-1 细胞系的影响 | 第35-40页 |
| 3.2.1 pcDNA3.1-cHSP25过表达载体验证 | 第35-36页 |
| 3.2.2 pcDNA3.1-cHSP25过表达载体转染效果 | 第36-38页 |
| 3.2.2.1 转染过表达载体的DF-1 细胞形态 | 第36页 |
| 3.2.2.2 细胞系总RNA抽提和反转录 | 第36-37页 |
| 3.2.2.3 cHSP25过表达效果 | 第37-38页 |
| 3.2.3 过表达cHSP25对其它HSPs的影响 | 第38页 |
| 3.2.4 过表达cHSP25对细胞凋亡和周期的影响 | 第38-40页 |
| 3.3 数字基因表达谱测序 | 第40-52页 |
| 3.3.1 数据过滤统计 | 第40-42页 |
| 3.3.2 比对分析 | 第42-43页 |
| 3.3.3 表达量分析 | 第43-44页 |
| 3.3.4 蛋白互作网络 | 第44-46页 |
| 3.3.5 GO功能分析 | 第46页 |
| 3.3.6 KEGG通路分析 | 第46-50页 |
| 3.3.7 差异表达基因和下游通路基因检测 | 第50-52页 |
| 3.3.7.1 干扰HSP25基因对差异表达基因及下游通路基因的检测 | 第50-51页 |
| 3.3.7.2 过表达HSP25基因对差异表达基因及下游通路基因的检测 | 第51-52页 |
| 3.4 热应激对DF-1 细胞系及期相关基因的影响 | 第52-58页 |
| 3.4.1 不同温度条件下的细胞形态 | 第52-53页 |
| 3.4.2 不同温度条件下的细胞总RNA抽提和反转录 | 第53页 |
| 3.4.3 热应激对cHSP25表达量的影响 | 第53-55页 |
| 3.4.4 热应激对其它HSPs的表达量影响 | 第55页 |
| 3.4.5 热应激对差异表达基因和下游通路基因表达量的影响 | 第55-56页 |
| 3.4.6 热应激对细胞凋亡和周期的影响 | 第56-58页 |
| 3.5 热应激条件下干扰cHSP25基因对相关基因和细胞的影响 | 第58-63页 |
| 3.5.1 热应激条件下cHSP25干扰片段转染效果 | 第58-59页 |
| 3.5.1.1 热应激条件下转染干扰片段的DF-1 细胞形态 | 第58页 |
| 3.5.1.2 细胞总RNA抽提和反转录 | 第58-59页 |
| 3.5.1.3 热应激条件下cHSP25的干扰效果 | 第59页 |
| 3.5.2 热应激条件下干扰cHSP25对其它HSPs的影响 | 第59-60页 |
| 3.5.3 热应激条件下干扰cHSP25对差异表达基因和下游通路基因的影响 | 第60-61页 |
| 3.5.4 热应激条件下干扰cHSP25对细胞凋亡和周期的影响 | 第61-63页 |
| 3.6 热应激条件下过表达cHSP25基因对相关基因和细胞的影响 | 第63-68页 |
| 3.6.1 热应激条件下pcDNA3.1-cHSP25过表达载体转染效果 | 第63-64页 |
| 3.6.1.1 热应激条件下转染过表达载体的DF-1 细胞形态 | 第63页 |
| 3.6.1.2 细胞系总RNA抽提和反转录 | 第63-64页 |
| 3.6.1.3 热应激条件下cHSP25过表达效果 | 第64页 |
| 3.6.2 热应激条件下过表达cHSP25对其它HSPs的影响 | 第64-65页 |
| 3.6.3 热应激条件下过表达cHSP25对差异表达基因和下游通路基因的影响 | 第65-66页 |
| 3.6.4 热应激条件下过表达cHSP25对细胞凋亡和周期的影响 | 第66-68页 |
| 4 讨论 | 第68-74页 |
| 4.1 细胞凋亡与细胞周期变化的关系 | 第68-69页 |
| 4.2 热应激诱导HSPs表达促进细胞凋亡 | 第69-70页 |
| 4.3 DGE测序分析的差异表达基因 | 第70-73页 |
| 4.4 下游通路相关基因的分析 | 第73-74页 |
| 5 结论 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 附录 | 第82-88页 |
