| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文缩略语及英文对照 | 第7-11页 |
| 1 前言 | 第11-20页 |
| 1.1 植物磷营养研究概述 | 第11-13页 |
| 1.1.1 磷对植物生长的重要性 | 第11页 |
| 1.1.2 植物适应低磷胁迫的生理机制 | 第11-12页 |
| 1.1.3 植物响应低磷胁迫的分子机制 | 第12-13页 |
| 1.2 酸性磷酸酶的研究进展 | 第13-14页 |
| 1.3 植物蛋白磷酸酶家族的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.3.1 植物蛋白磷酸酶组成 | 第14-15页 |
| 1.3.2 植物HAD功能的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.4 侧根发育研究概述 | 第16-18页 |
| 1.4.1 侧根的发育过程 | 第16页 |
| 1.4.2 影响侧根发育的因素 | 第16-18页 |
| 1.5 本研究的目的 | 第18-19页 |
| 1.6 研究的技术路线 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 供试材料 | 第20页 |
| 2.1.2 供试载体与菌株 | 第20页 |
| 2.1.3 供试培养基 | 第20页 |
| 2.1.4 供试试剂及配方 | 第20-22页 |
| 2.1.5 供试试剂及配方 | 第22页 |
| 2.1.6 主要设备 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-31页 |
| 2.2.1 大豆GmHAD1亚家族成员的生物信息学分析 | 第22-23页 |
| 2.2.2 大豆GmHAD1亚家族成员的表达模式分析 | 第23-24页 |
| 2.2.2.1 植物种植及处理 | 第23页 |
| 2.2.2.2 总RNA的提取及反转录 | 第23页 |
| 2.2.2.3 实时荧光定量PCR | 第23-24页 |
| 2.2.3 大豆GmHAD1亚家族亚细胞定位分析 | 第24-25页 |
| 2.2.3.1 GmHAD1:GFP表达载体的构建 | 第24页 |
| 2.2.3.2 烟草表皮细胞转化实验 | 第24-25页 |
| 2.2.3.3 GFP荧光的观察 | 第25页 |
| 2.2.4 GmHAD1亚家族成员的生化分析 | 第25-26页 |
| 2.2.4.1 GmHAD1:GST原核表达载体构建 | 第25页 |
| 2.2.4.2 GmHAD1亚家族成员蛋白纯化 | 第25页 |
| 2.2.4.3 GmHAD1亚家族成员蛋白检测 | 第25-26页 |
| 2.2.4.4 GmHAD1亚家族成员酶学性质分析 | 第26页 |
| 2.2.5 GmHAD1-2 点突变载体构建 | 第26-27页 |
| 2.2.6 GmHAD1-2 组织化学定位分析 | 第27-28页 |
| 2.2.6.1 GmHAD1-2:pro载体构建 | 第27页 |
| 2.2.6.2 拟南芥转化与后代筛选 | 第27-28页 |
| 2.2.6.3 GUS染色及观察 | 第28页 |
| 2.2.7 GmHAD1-2 功能分析 | 第28-30页 |
| 2.2.7.1 GmHAD1-2 超量表达载体的构建 | 第28页 |
| 2.2.7.2 GmHAD1-2 干涉表达载体的构建 | 第28页 |
| 2.2.7.3 大豆转基因复合植株的获得 | 第28-29页 |
| 2.2.7.4 大豆全磷及可溶性磷的测定 | 第29页 |
| 2.2.7.5 大豆酸性磷酸酶活性的测定 | 第29-30页 |
| 2.2.8 数据统计及分析 | 第30-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-46页 |
| 3.1 磷有效性影响大豆的生长及磷水平 | 第31-32页 |
| 3.1.1 低磷胁迫抑制大豆植株的生长和磷浓度 | 第31-32页 |
| 3.1.2 低磷胁迫促进大豆植株根系的生长 | 第32页 |
| 3.2 GmHAD1亚家族成员的生物信息学分析 | 第32-36页 |
| 3.2.1 GmHAD1家族基因进化树分析 | 第32-33页 |
| 3.2.2 HAD家族的序列比对及保守结构域分析 | 第33-34页 |
| 3.2.3 GmHAD1亚家族成员的三级结构预测 | 第34-35页 |
| 3.2.4 GmHAD1亚家族成员的关键氨基酸位点预测 | 第35-36页 |
| 3.3 大豆GmHAD1亚家族基因的表达模式分析 | 第36-38页 |
| 3.3.1 低磷对大豆叶部GmHAD1亚家族成员表达模式的调控 | 第36-37页 |
| 3.3.2 低磷对大豆地下部GmHAD1亚家族成员表达模式的调控 | 第37-38页 |
| 3.4 大豆GmHAD1亚家族成员的亚细胞定位分析 | 第38-39页 |
| 3.5 大豆GmHAD1亚家族成员的生化分析 | 第39-41页 |
| 3.5.1 大豆GmHAD1亚家族成员的蛋白磷酸酶活 | 第40-41页 |
| 3.6 GmHAD1-2 蛋白点突变分析 | 第41页 |
| 3.7 大豆GmHAD1-2 组织化学定位分析 | 第41-42页 |
| 3.8 GmHAD1-2 的功能分析 | 第42-46页 |
| 3.8.1 过表达GmHAD1-2 对大豆转基因复合植株生长的影响 | 第42-44页 |
| 3.8.2 抑制GmHAD1-2 表达对大豆因复合植株生长和磷吸收的影响 | 第44-46页 |
| 3.8.2.1 抑制GmHAD1-2 表达对大豆植株生长和磷效率的影响 | 第44-45页 |
| 3.8.2.2 抑制GmHAD1-2 表达影响大豆植株根系的生长 | 第45-46页 |
| 4 讨论与结论 | 第46-50页 |
| 4.1 讨论 | 第46-48页 |
| 4.1.1 低磷胁迫对大豆生长的影响 | 第46-47页 |
| 4.1.2 GmHAD1亚家族蛋白结构和生化特性分析 | 第47-48页 |
| 4.1.3 GmHAD1-2 的生物学功能 | 第48页 |
| 4.2 结论 | 第48-50页 |
| 致谢 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-59页 |
| 附录 | 第59-61页 |
