| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 英文缩略词 | 第5-10页 |
| 1 前言 | 第10-20页 |
| 1.1 生命的传承—种子及其萌发 | 第10-14页 |
| 1.1.1 种子萌发机制的研究现况 | 第10-13页 |
| 1.1.2 莴苣种子萌发的研究现状 | 第13-14页 |
| 1.2 ROS产生相关酶—POD | 第14-18页 |
| 1.2.1 POD在植物生长发育中的双重角色 | 第15-18页 |
| 1.3 本课题的目的与意义 | 第18-19页 |
| 1.4 研究技术路线 | 第19-20页 |
| 2 材料、试剂与方法 | 第20-42页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第20-22页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第20页 |
| 2.1.2 菌种和载体 | 第20页 |
| 2.1.3 酶与常用生化试剂 | 第20页 |
| 2.1.4 培养基与抗生素 | 第20-22页 |
| 2.2 试验方法 | 第22-42页 |
| 2.2.1 种子的萌发与取材 | 第22-23页 |
| 2.2.2 莴苣种子的过氧化物酶活性测定 | 第23-24页 |
| 2.2.3 莴苣种子过氧化物酶基因EST序列的克隆 | 第24-28页 |
| 2.2.4 莴苣种子过氧化物酶基因 3’端序列的克隆 | 第28-30页 |
| 2.2.5 莴苣种子过氧化物酶基因 5’端序列的克隆 | 第30-34页 |
| 2.2.6 过氧化物酶转录水平表达量的测定 | 第34-35页 |
| 2.2.7 过氧化物酶基因全长的拼接及验证 | 第35-36页 |
| 2.2.8 莴苣种子过氧化物酶基因的过表达载体构建 | 第36-39页 |
| 2.2.9 农杆菌介导的遗传转化 | 第39-42页 |
| 3 结果 | 第42-68页 |
| 3.1 莴苣种子的萌发 | 第42-46页 |
| 3.1.1 莴苣种子在水中的萌发 | 第42-43页 |
| 3.1.2 莴苣种子在 0.3% SDIC中的萌发 | 第43-45页 |
| 3.1.3 莴苣种子在 0.3 mM SHAM中的萌发 | 第45-46页 |
| 3.2 莴苣种子萌发过程中POD酶活性的变化 | 第46-51页 |
| 3.2.1 分光光度计法测莴苣种子中POD酶活 | 第47-49页 |
| 3.2.2 TMB组织化学染色检测莴苣种子POD酶活 | 第49-51页 |
| 3.3 莴苣种子中过氧化物酶基因的克隆 | 第51-56页 |
| 3.3.1 过氧化物酶基因的EST克隆 | 第51-53页 |
| 3.3.2 过氧化物酶基因的 3’端序列克隆 | 第53-54页 |
| 3.3.3 过氧化物酶基因的 5’端序列克隆 | 第54-56页 |
| 3.3.4 过氧化物酶基因的全长序列克隆 | 第56页 |
| 3.4 莴苣种子中过氧化物酶基因的生物信息学分析 | 第56-59页 |
| 3.4.1 莴苣种子LsPOD1蛋白的基本理化性质 | 第56页 |
| 3.4.2 莴苣种子LsPOD1蛋白信号肽与跨膜区的预测 | 第56-59页 |
| 3.4.3 莴苣种子LsPOD1的氨基酸序列与其他物种的过氧化物酶氨基酸序列比较 | 第59页 |
| 3.5 莴苣种子萌发过程中过氧化物酶转录水平的变化 | 第59-63页 |
| 3.5.1 总RNA的提取及反转录 | 第59-60页 |
| 3.5.2 模板浓度的确定，引物特异性检测和内参的选择 | 第60-62页 |
| 3.5.3 LsPOD1在莴苣种子中表达量的变化 | 第62-63页 |
| 3.6 莴苣LsPOD1基因过表达体系的建立 | 第63-68页 |
| 3.6.1 莴苣植株再生体系的建立 | 第65页 |
| 3.6.2 LsPOD1基因过表达载体的构建 | 第65-66页 |
| 3.6.3 农杆菌介导的遗传转化 | 第66-68页 |
| 4 讨论与总结 | 第68-71页 |
| 4.1 过氧化物酶活性变化与胚根伸长和胚乳弱化的关系 | 第68页 |
| 4.2 过氧化物酶基因表达与酶活性变化的关系 | 第68-69页 |
| 4.3 莴苣种子萌发过程中SDIC和SHAM的施加 | 第69页 |
| 4.4 POD在胚根与胚乳帽中的不同 | 第69页 |
| 4.5 转基因失败的原因推测 | 第69-70页 |
| 4.6 结论 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-80页 |
| 附录 | 第80页 |
