| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 中英文对照及英文缩写词表 | 第7-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-18页 |
| 1.1 Galectin-3 的概述 | 第10-14页 |
| 1.2 Casein Kinase I的概述 | 第14-16页 |
| 1.3 Galectin-3 磷酸化修饰的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.4 选题依据及研究意义 | 第17-18页 |
| 第二章 Casein Kinase Iδ 表达载体构建和蛋白提取 | 第18-30页 |
| 2.1 实验材料、试剂与仪器 | 第18-21页 |
| 2.1.1 实验材料与试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.2 实验试剂配制 | 第19-21页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-25页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第21页 |
| 2.2.2 RT-PCR扩增目的基因 | 第21-22页 |
| 2.2.3 目的基因与质粒的双酶切反应 | 第22-23页 |
| 2.2.4 目的基因与质粒的连接 | 第23页 |
| 2.2.5 制备感受态细菌 | 第23页 |
| 2.2.6 目的质粒的转化 | 第23-24页 |
| 2.2.7 Colony PCR验证 | 第24页 |
| 2.2.8 提取质粒并测序 | 第24页 |
| 2.2.9 诱导菌体表达目的蛋白 | 第24页 |
| 2.2.10 目的蛋白提取与纯化 | 第24-25页 |
| 2.2.11 变性聚丙烯胺凝胶电泳 | 第25页 |
| 2.2.12 蛋白透析与保存 | 第25页 |
| 2.3 实验结果与讨论 | 第25-30页 |
| 2.3.1 目的片段的获得 | 第25页 |
| 2.3.2 构建表达质粒 | 第25-26页 |
| 2.3.3 测序结果 | 第26-28页 |
| 2.3.4 目的蛋白的诱导表达 | 第28-30页 |
| 第三章 Casein Kinase Iδ 催化Galectin-3 磷酸化的反应体系和检测方法的研究 | 第30-38页 |
| 3.1 实验材料、试剂与仪器 | 第30-31页 |
| 3.1.1 实验材料与试剂 | 第30页 |
| 3.1.2 实验试剂配制 | 第30-31页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第31页 |
| 3.2 实验方法 | 第31-33页 |
| 3.2.1 Galectin-3 的磷酸化反应 | 第31-32页 |
| 3.2.2 HPLC法检测Galectin-3 磷酸化反应中ATP的消耗情况 | 第32页 |
| 3.2.3 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第32页 |
| 3.2.4 考马斯亮蓝染色与脱色 | 第32页 |
| 3.2.5 蛋白免疫印迹 | 第32页 |
| 3.2.6 优化Galectin-3 磷酸化反应条件 | 第32-33页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第33-38页 |
| 3.3.1 HPLC检测Galectin-3 磷酸化反应中ATP消耗情况 | 第33-35页 |
| 3.3.2 电泳和免疫印迹法检测Galectin-3 磷酸化反应产物 | 第35-36页 |
| 3.3.3 Galectin-3 磷酸化反应条件优化 | 第36-38页 |
| 第四章 Galectin-3 磷酸化位点的确定 | 第38-52页 |
| 4.1 实验材料、试剂与仪器 | 第38-39页 |
| 4.1.1 实验材料与试剂 | 第38页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第38-39页 |
| 4.2 实验方法 | 第39-41页 |
| 4.2.1 定点突变实验 | 第39-40页 |
| 4.2.2 突变体蛋白的提取 | 第40-41页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第41-52页 |
| 4.3.1 定点突变实验 | 第41-50页 |
| 4.3.2 Galectin-3 突变体蛋白的提取 | 第50页 |
| 4.3.3 Galectin-3 磷酸化位点的确定 | 第50-52页 |
| 总结 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
