| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第1章 文献综述 | 第9-15页 |
| 1.1 毛囊角蛋白关联蛋白简述 | 第9-10页 |
| 1.2 KAPs基因国内外研究现状 | 第10-12页 |
| 1.3 绵羊相关基因的原核表达与真核表达 | 第12-13页 |
| 1.3.1 绵羊相关基因的原核表达 | 第12页 |
| 1.3.2 绵羊相关基因的多克隆抗体制备 | 第12-13页 |
| 1.4 研究意义 | 第13-15页 |
| 第2章 绵羊毛囊KAP7基因的原核表达与多克隆抗体制备 | 第15-38页 |
| 2.1 材料与方法 | 第15-27页 |
| 2.1.1 动物材料 | 第15页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第15页 |
| 2.1.3 主要试剂配制 | 第15-17页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第17页 |
| 2.1.5 引物设计 | 第17-18页 |
| 2.1.6 皮肤毛囊总RNA提取 | 第18页 |
| 2.1.7 反转录RNA得到cDNA第一链 | 第18-19页 |
| 2.1.8 毛囊KAP7基因的PCR扩增 | 第19页 |
| 2.1.9 毛囊KAP7基因PCR产物回收 | 第19-20页 |
| 2.1.10 克隆载体pMD19-T-KAP7的构建 | 第20-22页 |
| 2.1.11 重组质粒pMD19-T-KAP7的提取 | 第22页 |
| 2.1.12 重组质粒pMD19-T-KAP7的双酶切鉴定 | 第22-23页 |
| 2.1.13 原核表达重组质粒pET-28a-KAP7的构建 | 第23-24页 |
| 2.1.14 原核表达重组质粒pET-28a-KAP7的双酶切鉴定与测序分析 | 第24页 |
| 2.1.15 绵羊毛囊KAP7基因的原核表达与检测 | 第24-25页 |
| 2.1.16 毛囊KAP7蛋白的提取，纯化，浓缩 | 第25-26页 |
| 2.1.17 多克隆抗体的制备 | 第26-27页 |
| 2.1.18 ELISA法检测抗体效价 | 第27页 |
| 2.2 结果分析 | 第27-35页 |
| 2.2.1 绵羊毛囊总RNA提取 | 第27-28页 |
| 2.2.2 18S PCR扩增 | 第28页 |
| 2.2.3 皮肤毛囊KAP7基因的扩增 | 第28-29页 |
| 2.2.4 重组克隆质粒pMD19-T-KAP7的双酶切鉴定 | 第29-30页 |
| 2.2.5 重组表达质粒pET-28a-KAP7的鉴定 | 第30页 |
| 2.2.6 毛囊KAP7基因的原核表达与检测 | 第30-31页 |
| 2.2.7 毛囊KAP7的纯化 | 第31-32页 |
| 2.2.8 ELISA法检测抗体效价 | 第32-33页 |
| 2.2.9 基因序列分析 | 第33页 |
| 2.2.10 毛囊KAP7基因编码蛋白一级结构分析 | 第33页 |
| 2.2.11 毛囊KAP7基因编码蛋白二级结构预测 | 第33-34页 |
| 2.2.12 毛囊KAP7基因编码蛋白三维结构预测 | 第34-35页 |
| 2.2.13 毛囊KAP7基因编码蛋白理化性质 | 第35页 |
| 2.3 讨论 | 第35-37页 |
| 2.4 小结 | 第37-38页 |
| 第3章 绵羊毛囊KAP7基因实时荧光定量PCR分析 | 第38-44页 |
| 3.1 材料与方法 | 第38-39页 |
| 3.1.1 动物材料 | 第38页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第38页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第38页 |
| 3.1.4 引物设计 | 第38页 |
| 3.1.5 总RNA提取与cDNA的获得 | 第38-39页 |
| 3.1.6 18S扩增验证cDNA | 第39页 |
| 3.1.7 使用梯度PCR仪选择最适合的退火温度 | 第39页 |
| 3.1.8 最适底物浓度的选择 | 第39页 |
| 3.1.9 实时荧光定量分析 | 第39页 |
| 3.2 结果分析 | 第39-42页 |
| 3.2.1 最适退火温度的选择 | 第39-40页 |
| 3.2.2 实时荧光定量扩增曲线和溶解曲线 | 第40-41页 |
| 3.2.3 毛囊KAP7基因表达量的分析 | 第41-42页 |
| 3.3 讨论 | 第42-43页 |
| 3.4 小结 | 第43-44页 |
| 第4章 绵羊毛囊KAP7基因的真核表达 | 第44-62页 |
| 4.1 材料与方法 | 第44-52页 |
| 4.1.1 动物材料 | 第44页 |
| 4.1.2 主要试剂及配制 | 第44页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第44-45页 |
| 4.1.4 引物设计 | 第45页 |
| 4.1.5 皮肤毛囊总RNA提取与反转录 | 第45页 |
| 4.1.6 毛囊KAP7基因的PCR扩增 | 第45页 |
| 4.1.7 重组克隆质粒pMD19-T-KAP7的构建 | 第45-46页 |
| 4.1.8 重组克隆质粒pMD19-T-KAP7的鉴定 | 第46页 |
| 4.1.9 重组真核表达质粒pEGFP-Nl-KAP7的构建 | 第46-47页 |
| 4.1.10 重组质粒pEGFP-Nl-KAP7的鉴定 | 第47-49页 |
| 4.1.11 COS-7 细胞的复苏、培养和传代 | 第49-50页 |
| 4.1.12 重组真核表达质粒pEGFP-N1-KAP7转染COS-7 细胞 | 第50页 |
| 4.1.13 重组真核表达质粒pEGFP-N1-KAP7转染COS-7 细胞的检测 | 第50页 |
| 4.1.14 毛囊角蛋白KAP7基因真核表达蛋白Western Blot检测 | 第50-52页 |
| 4.2 结果与分析 | 第52-59页 |
| 4.2.1 18S引物扩增 | 第52-53页 |
| 4.2.2 毛囊KAP7基因的PCR扩增 | 第53-54页 |
| 4.2.3 重组克隆质粒pMD19-T-KAP7鉴定 | 第54页 |
| 4.2.4 真核表达重组质粒pEGFP-N1-KAP7鉴定 | 第54-55页 |
| 4.2.5 重组质粒pEGFP-N1-KAP7转染COS-7 细胞的检测 | 第55-56页 |
| 4.2.6 重组质粒pEGFP-N1-KAP7在COS-7 细胞中表达蛋白Western Blot检测 | 第56-57页 |
| 4.2.7 毛囊KAP7基因编码蛋白一级结构分析 | 第57页 |
| 4.2.8 毛囊KAP7基因编码蛋白二级结构预测 | 第57-58页 |
| 4.2.9 毛囊KAP7基因编码融合蛋白三维结构预测 | 第58页 |
| 4.2.10 聚类分析 | 第58-59页 |
| 4.3 讨论 | 第59-61页 |
| 4.4 小结 | 第61-62页 |
| 第5章 结论 | 第62-63页 |
| 附件 | 第63-67页 |
| 参考文献 | 第67-75页 |
| 致谢 | 第75-77页 |
| 作者简介 | 第77页 |
