| abstract | 第4页 |
| Chapter 1 Review | 第8-22页 |
| 1.1 Overview of the iPLA2 | 第8-16页 |
| 1.1.1 Structural features of iPLA2 | 第9-11页 |
| 1.1.2 Regulation of iPLA2 activity | 第11-14页 |
| 1.1.2.1 Hydrogen peroxide (H2O2) | 第11页 |
| 1.1.2.2 ATP | 第11-12页 |
| 1.1.2.3 Ankyrin repeats and Oligomerization | 第12-13页 |
| 1.1.2.4 Ca~(2+)-calmodulin | 第13页 |
| 1.1.2.5 Phosphorylation | 第13页 |
| 1.1.2.6 Pharmacological inhibitors for iPLA2 | 第13-14页 |
| 1.1.3 Role of iPLA2 in Cancer | 第14-16页 |
| 1.2 Overview of Rab proteins | 第16-20页 |
| 1.2.1 Different roles of Rab proteins | 第16-17页 |
| 1.2.2 The Rab switch and its circuitry | 第17-18页 |
| 1.2.3 Rab and integrin endosomal recycling | 第18-20页 |
| 1.3 Hypothesis and Aims | 第20-22页 |
| Chapter 2 Materials and Methods | 第22-48页 |
| 2.1 E.coli and cell | 第22页 |
| 2.2 Antibody and reagent | 第22-24页 |
| 2.3 Instrument | 第24-25页 |
| 2.4 Plasmid | 第25页 |
| 2.5 DNA constructs and vectors | 第25-35页 |
| 2.5.1 Materials | 第25-27页 |
| 2.5.2 Methods | 第27-35页 |
| 2.5.2.1 GST-Rab4, 5, 7 and 11 constructs | 第27-31页 |
| 2.5.2.2 HisANK-NBM construct | 第31-35页 |
| 2.6 Protein purification | 第35-37页 |
| 2.6.1 Materials | 第35页 |
| 2.6.2 Methods | 第35-37页 |
| 2.6.2.1 GST-Rab4, 5, 7 and 11 protein purification | 第35-36页 |
| 2.6.2.2 HisANK protein purification | 第36页 |
| 2.6.2.3 HisANK-NBM protein purification | 第36-37页 |
| 2.7 Cell culture | 第37-39页 |
| 2.7.1 Materials | 第37页 |
| 2.7.2 Methods | 第37-39页 |
| 2.7.2.1 Cell culture | 第37页 |
| 2.7.2.2 Cells subculture | 第37-38页 |
| 2.7.2.3 Cryopreservation of cells | 第38-39页 |
| 2.7.2.4 Cells recovery | 第39页 |
| 2.8 Western blot | 第39-44页 |
| 2.8.1 Materials | 第39-40页 |
| 2.8.2 Methods | 第40-44页 |
| 2.8.2.1 The extraction of total protein in the cell | 第40页 |
| 2.8.2.2 SDS-PAGE | 第40-42页 |
| 2.8.2.3 Sample loading and electrophoresis | 第42页 |
| 2.8.2.4 Semi-Dry western blotting method | 第42-44页 |
| 2.9 GST pull down assay | 第44-45页 |
| 2.9.1 Materials | 第44页 |
| 2.9.2 Methods | 第44-45页 |
| 2.9.2.1 The interaction between GST-Rabs and iPLA2 | 第44-45页 |
| 2.9.2.2 The interaction between GST-Rabs and HisANK/HisANK-NBM | 第45页 |
| 2.10 Colocalization | 第45-47页 |
| 2.10.1 Materials | 第45-46页 |
| 2.10.2 Methods | 第46-47页 |
| 2.10.2.1 Co-transfection of iPLA2-GFP and Cherry-Rab5 | 第46页 |
| 2.10.2.2 Cell fixation and observation | 第46-47页 |
| 2.11 Co-immuprecipitation | 第47-48页 |
| 2.11.1 Materials | 第47页 |
| 2.11.2 Materials | 第47-48页 |
| Chapter 3 Results | 第48-64页 |
| 3.1 Plasmid construction and bacterial expression | 第48-54页 |
| 3.1.1 GST-Rab4, 5, 7 and 11 plasmid construction and bacterial expression | 第48-50页 |
| 3.1.2 Optimizing the HisANK purification condition | 第50-51页 |
| 3.1.3 HisANK-NBM plasmid construction and bacterial expression | 第51-54页 |
| 3.2 Interaction between iPLA2 and Rab5 | 第54-58页 |
| 3.2.1 Examination of the association between iPLA2 and Rab5 using GST pulldown assay | 第54-55页 |
| 3.2.2 Co-immunoprecipitation | 第55-56页 |
| 3.2.3 Colocalization of iPLA2-GFP and mCherry-Rab5 | 第56-58页 |
| 3.3 Ankyrin-like repeated domain contributes to the direct binding of iPLA2 with Rab5 | 第58-61页 |
| 3.4 The interaction between iPLA2 and Rab5 was regulated by ATP | 第61-64页 |
| Chapter 4 Discussion | 第64-68页 |
| Chapter 5 Conclution | 第68-70页 |
| 5.1 There is a specific interaction between iPLA2 and Rab5 | 第68页 |
| 5.2 Ankyrin-like repeated domain contribute the direct binding of iPLA2 to Rab5 | 第68页 |
| 5.3 The interaction between iPLA2 and Rab5 was regulated by activation status of Rab5in cells | 第68页 |
| 5.4 ATP binding to iPLA2 affects the interaction between iPLA2 and Rab5 | 第68页 |
| 5.5 iPLA2 colocalizes with Rab5 in activated microglia and this can be altered uponRab5 activation | 第68-70页 |
| References | 第70-82页 |
| Acknowledgements | 第82-83页 |
