工程大肠杆菌生产酪醇葡萄糖苷
| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 前言 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-22页 |
| 1.1 红景天苷药理活性 | 第11-13页 |
| 1.1.1 红景天苷的结构 | 第11-12页 |
| 1.1.2 对神经系统的保护 | 第12页 |
| 1.1.3 保护心血管 | 第12页 |
| 1.1.4 抗癌活性 | 第12-13页 |
| 1.1.5 抗缺氧、抗疲劳以及抗衰老作用 | 第13页 |
| 1.2 红景天苷的市场应用 | 第13-15页 |
| 1.2.1 在保健品方面的应用 | 第14页 |
| 1.2.2 在药品方面的应用 | 第14页 |
| 1.2.3 在化妆品方面的应用 | 第14-15页 |
| 1.3 红景天苷制备方法 | 第15-17页 |
| 1.3.1 从红景天植物中提取制备红景天苷 | 第15页 |
| 1.3.2 化学合成制备红景天苷 | 第15-16页 |
| 1.3.3 生物酶法制备红景天苷 | 第16页 |
| 1.3.4 重组微生物合成红景天苷 | 第16-17页 |
| 1.4 酪醇的生物合成 | 第17-18页 |
| 1.4.1 酪氨酸脱羧途径合成酪醇 | 第17-18页 |
| 1.4.2 酪氨酸转氨途径合成酪醇 | 第18页 |
| 1.5 UDP-葡萄糖代谢工程改造 | 第18-19页 |
| 1.5.1 增强UDP-葡萄糖合成途径 | 第18页 |
| 1.5.2 阻断竞争及降解途径 | 第18-19页 |
| 1.6 人工合成混菌体系优化代谢途径 | 第19-20页 |
| 1.6.1 大肠杆菌-大肠杆菌混菌体系 | 第19-20页 |
| 1.6.2 大肠杆菌-酿酒酵母混菌体系 | 第20页 |
| 1.7 本文的主要研究内容以及意义 | 第20-22页 |
| 1.7.1 主要研究内容 | 第20-21页 |
| 1.7.2 研究意义 | 第21-22页 |
| 第二章 大肠杆菌合成酪醇途径的构建与优化 | 第22-47页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-27页 |
| 2.1.1 实验所用菌株与质粒 | 第22-24页 |
| 2.1.2 实验所用试剂与仪器 | 第24-25页 |
| 2.1.3 实验所用引物 | 第25-26页 |
| 2.1.4 培养基 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-34页 |
| 2.2.1 PCR反应扩增目的基因 | 第27页 |
| 2.2.2 重叠延伸PCR扩增敲除整合片段 | 第27-28页 |
| 2.2.3 碱法提取质粒 | 第28-29页 |
| 2.2.4 酶切连接反应 | 第29-30页 |
| 2.2.5 转化 | 第30页 |
| 2.2.6 菌落PCR | 第30页 |
| 2.2.7 质粒电击转化方法 | 第30-31页 |
| 2.2.8 密码子优化 | 第31页 |
| 2.2.9 酮基脱羧酶表达载体构建 | 第31-32页 |
| 2.2.10 λ-red同源重组方法 | 第32-33页 |
| 2.2.11 摇瓶发酵检测 | 第33-34页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第34-45页 |
| 2.3.1 酮基脱羧酶基因的筛选与表达 | 第34-38页 |
| 2.3.2 IPTG浓度对酪醇产量的影响 | 第38-39页 |
| 2.3.3 乙醇脱氢酶基因的过表达 | 第39-41页 |
| 2.3.4 高产酪醇菌株的构建 | 第41-45页 |
| 2.4 本章小结 | 第45-47页 |
| 第三章 UDP-葡萄糖的合成途径改造 | 第47-63页 |
| 3.1 实验材料 | 第47-50页 |
| 3.1.1 实验所用菌株与质粒 | 第47-48页 |
| 3.1.2 实验所用试剂与仪器 | 第48-49页 |
| 3.1.3 实验所用引物 | 第49-50页 |
| 3.2 实验方法 | 第50-54页 |
| 3.2.1 密码子优化 | 第50-51页 |
| 3.2.2 糖基转移酶表达载体构建 | 第51页 |
| 3.2.3 红景天苷转化底盘菌株构建 | 第51-53页 |
| 3.2.4 摇瓶发酵检测 | 第53-54页 |
| 3.3 结果与分析 | 第54-61页 |
| 3.3.1 糖基转移酶基因的筛选与表达 | 第54-58页 |
| 3.3.2 酪醇糖苷转化底盘菌株的构建 | 第58-61页 |
| 3.3.3 BMS11合成酪醇糖苷的性能 | 第61页 |
| 3.4 本章小结 | 第61-63页 |
| 第四章 大肠杆菌混合培养发酵生产酪醇糖苷 | 第63-72页 |
| 4.1 实验材料 | 第63-64页 |
| 4.1.1 菌株与质粒 | 第63-64页 |
| 4.1.2 实验所用试剂及仪器 | 第64页 |
| 4.1.3 实验所用引物 | 第64页 |
| 4.2 实验方法 | 第64-65页 |
| 4.2.1 表达载体构建 | 第64-65页 |
| 4.2.2 发酵检测 | 第65页 |
| 4.2.3 菌株生长状况表征 | 第65页 |
| 4.3 结果与分析 | 第65-71页 |
| 4.3.1 大肠杆菌-大肠杆菌共培养体系设计 | 第65-66页 |
| 4.3.2 共培养系统中菌群比例优化 | 第66-69页 |
| 4.3.3 共培养系统中碳源比例优化 | 第69-70页 |
| 4.3.4 分批补料发酵生产酪醇糖苷 | 第70-71页 |
| 4.4 本章小结 | 第71-72页 |
| 第五章 结论与展望 | 第72-74页 |
| 5.1 主要结论 | 第72-73页 |
| 5.2 展望 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-79页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
